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  • 單克隆抗體的制備——有限稀釋克隆法

    實驗步驟 附 加 材 料(其他材料見基本方案 2)候 選 雜 交 瘤 系(見輔助方案 2)克隆和擴增用培養基(見輔助方案 4)微 孔 板 觀 察 鏡(由 Flow 實驗室或 Dynatech 公司提供),可選的1.重懸候選雜交瘤所在孔中的細胞(見 輔 助 方 案 2 , 步 驟 4),用血細胞計數器和臺盼藍 拒 染 試 驗(附 錄 3C) 對 一 部 分(50|ul) 細胞進行計數和細胞活力測試。2.以每毫升 5 0 個活細胞和每毫升 5 個活細胞的量分別準備 IOml 含有克隆和擴增用養 基 的 細 胞 懸 液(根據需要多次稀釋)。將 細 胞 懸 液 移 種 至 9 6 孔 板 ,每 個 孔 200ul(最終每孔分別為 1 0 個細胞和 1 個細胞)。 CO2 培養箱中培養 7?10d。3.觀察出現雜交瘤生長的孔數,以確定哪一種稀釋度對于單克隆的生長是最佳的。把孔板舉高肉眼觀察或使用微孔板觀察鏡對雜交瘤進行觀察。4.......閱讀全文

    單-克-隆-抗-體-的-制-備——有限稀釋克隆法

    實驗步驟?附 加 材 料(其他材料見基本方案 2)候 選 雜 交 瘤 系(見輔助方案 2)克隆和擴增用培養基(見輔助方案 4)微 孔 板 觀 察 鏡(由 Flow 實驗室或 Dynatech 公司提供),可選的1.重懸候選雜交瘤所在孔中的細胞(見 輔 助 方 案 2 , 步 驟 4),用血細胞計數器

    單-克-隆-抗-體-的-制-備——雜交瘤的建系

    實驗步驟?在單克隆抗體的特異性得到充分驗證之前,應該對所有候選的雜交瘤進行建系。但為了減少不必要的工作量,可以選擇其中 2 0 個最佳的候選孔。在檢測這 2 0 個孔的培養上 清(見輔助方案1 ) 為陽性后,應該將這些孔的細胞進行凍存,同時進行有限稀釋。附 加 材 料(其他材 料 見 基 本 方 案

    單-克-隆-抗-體-的-制-備——細胞融合與雜交瘤分選

    實驗步驟?在 篩 選 檢 測(輔助方案 1 ) 方案完善之前不應進行細胞融合。由于在細胞融合后可對目標單克隆抗體進行檢測的次數是有限的,在細胞融合前必須檢查條件培養液以排除篩選時可能出現的人為因素影響。材 料SP2/0-Agl4 骨 髓 瘤 細 胞 系(藥物標記的非分泌型; ATCC)添加10 mm

    單-克-隆-抗-體-的-制-備——克隆和擴增用培養基的制備

    實驗步驟?附 加 材 料(其他材料見基本方案 2)小鼠(以 BALB/c 小鼠為例), 5 或 6 只 , 4?6 周齡,無 病 原 體(有可靠來源,避免支原體感染)75 cm2 組織培養用細頸瓶0.45 過濾裝置1.用頸椎脫臼法或二氧化碳窒息法處死 5 或 6 只 小 鼠(附 錄 2 G; 避免使

    單-克-隆-抗-體-的-制-備——雜交瘤培養上清的篩選分析

    實驗步驟?附 加 材 料(其他材料見基本方案 2)在 9 6 孔板中生長的雜交瘤(見基本方案 2)添 加 10 mmol/L HEPES的 DMEM-2 0 完 全 培 養 基(附 錄 1)多道移液器和9 6 孔板,可選的1.在倒置顯微鏡下觀察生長的雜交瘤的孔數。確定是對所有孔進行細胞篩選還是只篩選

    單-克-隆-抗-體-的-制-備——單克隆抗體制備中的免疫接種

    實驗步驟?材料靶抗原:表達于細胞的抗原,或蛋白質、多肽生理鹽水無血清培養基:僅用于細胞接種弗 氏 完 全 佐 劑( complete Freunds adjuvant, CFA), Sigma 公司實驗動物:無 病 原 體 大 鼠 、小 鼠(推 薦 使 用 BALB/c小 鼠)或 倉 鼠(推薦使用C

    多-克-隆-抗-血-清-的-制-備2

    使 用 其 他 佐 劑 制 備 多 克 隆 抗 體 的 免 疫 接 種 法實驗步驟用 其 他 佐 劑 制 備 多 克 隆 抗 體 的 免 疫 接 種 法附 加 材 料(其他材料見基本方案)TiterMaxttR-I (CytRx; 4°C 下儲存少于 24 個月)或 Ribi 佐 劑 系 統(RAS

    單-鏈-抗-體-的-噬-菌-體-展-示-技-術

    實驗步驟?基 本 方 案 1 全套單鏈抗體噬菌體載體的構建材 料新鮮分離的小鼠脾臟或者 IO7 雜 交 瘤 細 胞(單 元 1*3)R N A 提取試劑R T -P C R 試劑D E P C 水寡 核 苷 酸 引 物(表 14. 3.1)DNA marker瓊脂糖膠回收試劑盒(Qiaquick G

    T-淋巴細胞增殖實驗

    實驗步驟基 本 方 案 1 未 致 敏 T 淋巴細胞的活化材 料備選方案1 用抗體激活未致敏的T 細胞這種方法適用于當抗C D 3/T C R 復合物抗體不能有效結合小鼠輔助細胞上的F c 受體 ,或其可溶形式不能有效活化T 細胞時。值得注 意 的 是 ,在 某 種 抗 體(如 抗 G 7、Thy-

    制-備-E-B-V-轉-化-的-B-細胞

    實驗步驟基 本 方案材 料P M I - I O 完全培養基B 95-8 細 胞(絨猴細胞株; A T C C # C R L 1612),對數生長期外 周 肝 素 抗 凝 血(附 錄 3 G ) ,扁桃體、脾臟細胞或骨髓P B SFicoll-Hypaque 溶液H B S Slmg/m l 環

    P1克隆的定義

    中文名稱P1克隆英文名稱P1 cloning定  義一種使用P1噬菌體載體擴增插入片段的克隆系統。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)

    T-細-胞-克-隆-的-建-立

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    細菌過濾效率測試儀菌液備制有哪些?

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    粉末電阻測試儀試樣處理備制及使用要求

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    干細胞的鑒定實驗——掃-描-電-鏡-樣-品-制-備-方-法

    實驗步驟掃 描 電 鏡 樣 品 制 備 方 法取材取材的要求基本與透射電鏡相同,但觀察樣品面積可大些 [(l-l.5) mm x (3?5)mm 。清洗組織表面如覆蓋有黏液、分泌物 (如 氣管、腸等) 或有一些雜物 (如胃表面除有分泌物外還有未消化的食物等) 的樣品,需經過充分清洗后方可固定,否則將

    酶-聯-免-疫-吸-附-實-驗——抗體夾心ELISA法檢測可溶性抗原

    實驗步驟抗 體 夾 心 ELISA 法檢測可溶性抗原該檢測方法比抗原直接結合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2?5 倍(圖 I.1. 3)。附 加 材 料(其他材料見基本方案)特 異 性 抗 體(單 克 隆 或 多 克 隆 )或 者 來 自 抗 血 清 、腹 水 或 雜 交 瘤 上 清 液(單

    人-NK-T-細-胞-的-分-離-和-擴-增

    實驗步驟基本方案 1 NK T 細胞的鑒定材 料外周肝素抗凝血P B SR P M I -1640 培養基,含 1 0 % (V /V ) 人血清或 F C S 以 及 10U /m l I L -2 (可選)流 式 細 胞 緩 沖 液(flow cytometry buffer, FCbuffer

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      抗ssDNA是抗DNA抗體中臨床意義和重要性都不如抗dsDNA的一種,DNA是一個大分子的復合物,由兩條核苷酸鏈形成的雙螺旋結構。加熱時堿基間的氫鍵斷裂,DNA變性產生ssDNA。抗ssDNA的反應位點主要是ssDNA上的嘌呤和嘧啶構成的堿基。

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    單克隆抗體的發展經歷了四個階段,分別為:鼠源性單克隆抗體、嵌合性單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人源單克隆抗體。全人源單克隆抗體:其抗體的可變區和恒定區都是人源的,去除免疫原性和毒副作用。全人源抗體制備的相關技術主要有:人雜交瘤技術、EBV 轉化 B 淋巴細胞技術、噬菌體顯示技術(phage dis

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    關于全人源單克抗體的基本介紹

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    抗-體-的-體-內-誘-導-和-檢-測

    實驗步驟基 本 方案 1 蛋白質或多糖抗原體內法誘導抗體的產生材 料人外周血類毒素混合物: 25Lf U/ml 白 喉 類 毒 素(Connaught Laboratories 或 State Laboratoriy Institute of Massachusetts) 與 IOLf U/ml 破

    如何健康“備孕”?

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