免疫電鏡標本固定實驗
實驗步驟1. 血管灌注固定固定效果最好,能使超微結構得到很好的保存。灌注裝置由加壓氣球、壓力表、三通接頭和連接管道組成。不同的組織器官必須選擇合適的灌注壓力,詳見有關書籍。灌注固定一般維持 10~15 min。然后用相同的固定液繼續浸泡固定 2~4 h。2. 浸泡固定組織塊切小后立即投入到固定液中,置于 4℃ 固定 2~4 h。游離培養細胞離心后去上清,加入 20 倍體積的固定液,用吸管將細胞團塊打散,固定 25~30 min。3. 微波固定微波能加速組織內部分子、外部化學物質的運動和擴散。應用微波照射可以縮短固定時間,而且抗原能得到較好保存。一般 700 W 微波照射 10 s,在微波爐內放 1000 ml 的冷水以吸收熱量(保持溫度在 35℃ 以下),然后繼續用固定液固定 2~4 h。展開 注意事項其他目前常用免疫電鏡標本固定液主要有以下幾種。1. 多聚甲醛-戊二醛混合固定液(簡稱 PG 固定液)推薦用 2%~4%......閱讀全文
免疫電鏡標本固定實驗
實驗步驟1. 血管灌注固定固定效果最好,能使超微結構得到很好的保存。灌注裝置由加壓氣球、壓力表、三通接頭和連接管道組成。不同的組織器官必須選擇合適的灌注壓力,詳見有關書籍。灌注固定一般維持 10~15 min。然后用相同的固定液繼續浸泡固定 2~4 h。2. 浸泡固定組織塊切小后立即投入到固定液中,
免疫電鏡標本固定實驗
實驗方法原理 實驗步驟 1. 血管灌注固定固定效果最好,能使超微結構得到很好的保存。灌注裝置由加壓氣球、壓力表、三通接頭和連接管道組成。不同的組織器官必須選擇合適的灌注壓力,詳見有關書籍。灌注固定一般維持 10~15 min。然后用相同的固定液繼續浸泡固定 2~4 h。2. 浸泡固定組織塊切小后立即
免疫標記電鏡技術標本制備的要求
為保持組織的抗原性,固定劑不宜過強。 1.包埋前染色 優點是切片染色前不經過鋨酸固定、脫水及樹脂包埋等過程,抗原未被破壞,易于獲得良好的免疫反應。特別適用于含抗原量較少的組織。 2.包埋后染色 優點是超微結構保存較好,方法簡便,陽性結構有高度的可重復性,能在同一張切片上進行多重免疫染色。
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗——免疫吸附法
實驗方法原理有時由于病毒量少,用普通懸滴法在電鏡下難以發現稀少散在的病毒粒子,則可用免疫吸附電鏡法。主要是利用相應的病毒抗血清來吸附病毒,用本法檢測病毒,快速、靈敏、特異性強,是可靠的電鏡病毒診斷技術之一,也可用于病毒快速診斷。實驗材料病毒試劑、試劑盒磷鎢酸儀器、耗材透射電鏡實驗步驟將抗病毒血清分別
掃描電鏡生物標本制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 病毒試劑、試劑盒 無儀器、耗材 掃描電鏡實驗步驟 1. 標本的初步處理 待檢標本都具有柔軟而且含有大量水分的特點,在高度真空的掃描電鏡中觀察的標本都必須是干燥標本,因此,病毒標本在用掃描電鏡觀察之前都必須進行預處理并達到以下要求:(1) 標本的預處理要求:①盡可能使標
掃描電鏡生物標本制備實驗
實驗材料病毒試劑、試劑盒無儀器、耗材掃描電鏡實驗步驟1. 標本的初步處理 待檢標本都具有柔軟而且含有大量水分的特點,在高度真空的掃描電鏡中觀察的標本都必須是干燥標本,因此,病毒標本在用掃描電鏡觀察之前都必須進行預處理并達到以下要求:(1) 標本的預處理要求:①盡可能使標本的形貌和結構保持活體時的近似
免疫電鏡相關技術實驗——酶標記免疫電鏡技術
實驗方法原理該技術是以酶為抗原—抗體反應的標記物,在不改變抗原抗體的免疫反應特異性,亦不降低酶活性條件下,與相應底物作用后形成不溶性的反應物。在電鏡下形成為電子散射力強的終末產物。用于免疫電鏡標記的酶有辣根過氧化物酶 (HRP)堿性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗——懸滴標本法
實驗方法原理病毒等微小顆粒標本可取其培養物經稀釋或分離提純后直接滴于附有支持膜的載網上用電鏡觀察。實驗材料病毒試劑、試劑盒稀釋液儀器、耗材透射電鏡實驗步驟懸液應盡量除去雜質如培養基殘渣,細胞碎片、糖類及各種鹽類的結晶等,這些雜質的存在會干擾染色及電鏡觀察。用該法的缺點是由于電子穿透能力很弱,只能觀察
免疫電鏡相關技術實驗
實驗方法原理 該方法是用電鏡直接觀察病毒抗原與相應抗體結合后形成的大分子復合物。實驗材料 病毒試劑、試劑盒 抗體儀器、耗材 電子顯微鏡實驗步驟 直接將病毒抗原與對應抗體孵育后上電子顯微鏡觀察即可。具有簡單易行,抗原和抗體用量少在該時間內即可得到結果等優點,可用于檢出病毒或進行病毒分型,并已用于臨床診
免疫電鏡相關技術實驗—病毒顆粒免疫電鏡技術
病毒是極微小的生物體,用電鏡觀察時,由于其變形、損傷或雜質的存在,以及標本中病毒的數量有限,只靠其形態特點較難確切辨認。為了提高辨認的準確性,可應用特異性抗體,使其與病毒結合,在電鏡下可清晰地辨認特異性抗體及其結合的病毒。這種將免疫學檢測方法應用于電鏡檢查的技術就是免疫電鏡技術 (Immunoele
細菌透射電鏡樣品制備實驗固定
實驗方法原理為了保持菌體的原有形狀,常用戊二醛、甲醛、鋨酸蒸氣等試劑小心固定后再進行染色。實驗材料菌懸液試劑、試劑盒固定液(如 pH 7.20.15% 的戊二醛磷酸緩沖液)戊二醛無菌水2% 的磷鎢酸鈉水溶液儀器、耗材冰箱無菌毛細吸管無菌濾紙實驗步驟1. 將用無菌水制備好的菌懸液經過濾,然后向濾液中加
細菌透射電鏡樣品制備實驗——-固定
實驗方法原理為了保持菌體的原有形狀,常用戊二醛、甲醛、鋨酸蒸氣等試劑小心固定后再進行染色。實驗材料菌懸液試劑、試劑盒固定液(如 pH 7.20.15% 的戊二醛磷酸緩沖液)戊二醛無菌水2% 的磷鎢酸鈉水溶液儀器、耗材冰箱無菌毛細吸管無菌濾紙實驗步驟1. 將用無菌水制備好的菌懸液經過濾,然后向濾液中加
免疫電鏡相關技術實驗——膠體金標記免疫電鏡技術
實驗材料病毒試劑、試劑盒膠體金儀器、耗材電子顯微鏡實驗步驟免疫膠體金標記技術又稱免疫金染色技術 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年發現直徑為 5~50nm 的膠體金 (colloidal gold) 在電鏡下具有很高的電
非標記抗體免疫電鏡實驗
實驗方法原理 標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組
鐵蛋白免疫電鏡實驗
實驗方法原理 免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體,再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查,觀察到鐵蛋白抗體所在的位置,即抗原所在。實驗材料 馬脾鐵蛋白試劑、試劑盒 硫酸銨硫酸鎘雙異氰酸鎘二甲苯硼鹽酸緩沖液硫酸銨液 PBS蒸餾水儀器、耗材 離心機顯微鏡微孔濾膜實驗步驟 一、材料與試劑準備?1. ?馬
鐵蛋白免疫電鏡實驗
鐵蛋白免疫可應用于:(1)檢測抗原;(2)定位細胞內鐵蛋白抗體位置。實驗方法原理免疫鐵蛋白技術是以鐵蛋白標記抗體,再以鐵蛋白抗體與待檢抗原作用。通過電鏡檢查,觀察到鐵蛋白抗體所在的位置,即抗原所在。實驗材料馬脾鐵蛋白試劑、試劑盒硫酸銨硫酸鎘雙異氰酸鎘二甲苯硼鹽酸緩沖液硫酸銨液?PBS蒸餾水儀器、耗材
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗2
實驗方法原理病毒研究中用磷鎢酸染色后發現在黑色背景中病毒粒子如同一個亮晶晶的「空洞」。爾后用磷鎢酸對飛噬菌體染色也見到同樣的現象,即將這種現象稱為「負染色」。負染色是一種反襯染色,即高密度物質如重金屬磷鎢酸、醋酸鈾等在透射電鏡下形成黑色的背景反襯低密度的標本如病毒為白色透亮,從而清楚地顯示出被襯物的
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗4
直接取材鏡檢法實驗材料病毒試劑、試劑盒磷鎢酸儀器、耗材透射電鏡實驗步驟為了進行天花、水痘、皰疹等病毒的臨床快速診斷,可用毛細吸管直接刺入病人皮膚皰疹內吸取少量泡液,立即滴于有膜的銅網上,稍干后即用 1%-2% 的磷鎢酸溶液進行負染,待干后立即用電鏡觀察。于電鏡下常可于短時間內發現典型的病毒顆粒。注意
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗1
懸滴標本法實驗方法原理病毒等微小顆粒標本可取其培養物經稀釋或分離提純后直接滴于附有支持膜的載網上用電鏡觀察。實驗材料病毒試劑、試劑盒稀釋液儀器、耗材透射電鏡實驗步驟懸液應盡量除去雜質如培養基殘渣,細胞碎片、糖類及各種鹽類的結晶等,這些雜質的存在會干擾染色及電鏡觀察。用該法的缺點是由于電子穿透能力很弱
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗3
免疫吸附法實驗方法原理有時由于病毒量少,用普通懸滴法在電鏡下難以發現稀少散在的病毒粒子,則可用免疫吸附電鏡法。主要是利用相應的病毒抗血清來吸附病毒,用本法檢測病毒,快速、靈敏、特異性強,是可靠的電鏡病毒診斷技術之一,也可用于病毒快速診斷。實驗材料病毒試劑、試劑盒磷鎢酸儀器、耗材透射電鏡實驗步驟將抗病
脫落細胞標本制作如何固定?
1.目的 主要是保持細胞的自然形態,固定愈快,細胞愈新鮮,染色效果愈好。2.常用固定液(1)乙醚乙醇固定液:此液滲透性強,固定效果好。適用于HE染色和巴氏染色。(2)95%乙醇固定液:適用于大規模防癌普查。制備簡單,但滲透能力較差。3.固定方法(1)帶濕固定:即涂片尚未干燥即行固定。適用于痰液、宮頸
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗——負染色技術
實驗方法原理病毒研究中用磷鎢酸染色后發現在黑色背景中病毒粒子如同一個亮晶晶的「空洞」。爾后用磷鎢酸對飛噬菌體染色也見到同樣的現象,即將這種現象稱為「負染色」。負染色是一種反襯染色,即高密度物質如重金屬磷鎢酸、醋酸鈾等在透射電鏡下形成黑色的背景反襯低密度的標本如病毒為白色透亮,從而清楚地顯示出被襯物的
電鏡固定液可以保存多久
可以長期保存。但是需要在特定適宜的溫度,一般是4°和固定適合的環境下。甲醛固定液在4℃可存放半年,這是推薦的存放溫度。一般是推薦的,這時戊二醛可以長時間保存,但是如果時間太長可能會出現變色的問題,就可以換一次戊二醛。而還有不同的固定液也不同。比如用于外科活檢固定的良好固定液,用于固定大多數器官和組織
非標記抗體免疫電鏡實驗——經典法
不標記抗體法通過系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織中的抗原進行定位檢測。分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。用于(1)抗體觀察(2)免疫學研究。實驗方法原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有
電鏡下雙/多重免疫標記實驗
電鏡下的雙重免疫標記染色不是靠顏色區分,而是靠標記物的不同電子密度或顆粒的不同大小來區別不同抗原,有別于光鏡下的雙重免疫標記方法。多采用雙重免疫金標記,其最大優點是高電子密度、分辨率高、抗原定位精確、顆粒大小可人工控制、標記試劑易制備。但也存在一些不足,如非特異吸附干擾大(背景)、對所用試劑質量要求
電鏡固定(電鏡,戊二醛,灌流,多聚甲醛)
問:做電鏡灌流,用2%多聚甲醛+2%戊二醛灌流固定,結果配成1%多聚甲醛+1%戊二醛了,這兩個濃度對電鏡的固定有影響嗎?我怕固定得不好,修完組織塊兒后放在2.5%的戊二醛里固定5小時,這樣可以嗎?答:沒問題的,我們不灌流,取完了放2.5%的戊二醛也沒問題。這個要看你做那部分組織,如果是腦組織,那么灌