濕轉的話,60KDa的蛋白轉膜60分鐘~90分鐘一般就足夠了轉膜完成后可以將SDS-PAGE膠片去做一下考染,看看是否有未完全轉膜的條帶。如果有的話,可以下次適當延長專膜時間。
VDF膜一定要在純甲醇里浸潤的!不然蛋白結合不上去。在100%甲醇里短暫浸潤,其目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團,使它更容易跟帶負電的蛋白質結合。小分子及大分子量的蛋白轉移時,多加或不加甲醇也是......