bioradPCR儀的熱啟動是什么意思

在傳統的PCR反應中，極易發生引物錯配和二聚體的形成，繼而導致非特異性產物的擴增。熱啟動方法的問世有效地解決了這些問題，不僅優化了目標擴增產物，同時也減少了非特異性擴增，而且使得在傳統PCR技術中較難擴增的單拷貝基因以及超長片段變得更簡便。
金思德 E1000-PCR儀是目前市場上唯一具有熱啟動功能的PCR儀，它主要是通過物理方法實現的熱啟動，能夠在不使用昂貴的熱啟動酶的條件下，就可以有效地減少反應中非特異性產物的產生。
經實驗室的研究結果表明，通過使用E1000-PCR儀的熱啟動功能，能夠有效地幫助實驗人員在做較難擴增的目標產物時得到最佳的實驗結果，減少實驗摸索時間，快速解決問題。
實例：
PCR擴增目的基因：Human dystrophin gene, Alu7-2 repeat。
PCR擴增片段大小：320bp。
PCR的反應體系：25ul體系，包含模板DNA（人基因組DNA）-1ul；上下游引物各0.5ul；dNTP -0.5ul；Buffer -2.5 ul；Taq酶0.25 ul；ddH2O-19.75ul。
PCR的反應條件：94℃ 2min; 94℃ 50s,67℃1min,72℃ 2min,42cycles;72℃ 10min;4℃∞。
熱啟動的操作步驟：
1. 打開E1000-PPCR儀，建立實驗方法條件；
2. 選擇熱啟動模式；
3. 儀器加熱板升溫，待儀器升溫至80℃；
4. 打開儀器熱蓋，將空的PCR管放置于熱板上；
5. 依次將反應體系中各組分加入PCR管中；
6. 合上熱蓋，點擊“Run”按鈕，開始運行。
PCR產物電泳結果：
（1）PCR反應體系中含有普通的Taq酶：

圖1 圖2
圖1為熱啟動方式下的PCR產物電泳結果；圖2為傳統啟動方式下的PCR產物電泳結果，兩種啟動方式下的反應的體系及條件均一致。
從圖中可見，熱啟動方式下的PCR產物的電泳結果較為理想，目的條帶清晰，非
特異性條帶較少，且條帶拖尾現象較弱；而傳統啟動方式下的PCR產物的電泳結果就
不是十分的理想，雖可見目的條帶，但條帶較為模糊，拖尾現象較為嚴重。
（2）PCR反應體系中含有Taq-plus酶：

圖3 圖4
圖3為熱啟動方式下的PCR產物電泳結果；圖4為傳統啟動方式下的PCR產物電泳結果，兩種啟動方式下的反應的體系及條件均一致。
從圖中可見，熱啟動方式比傳統啟動方式下的PCR產物的電泳結果更為理想，目
的片段擴增更加清晰，非特異性條帶亮度較弱。
（3）PCR反應體系中含有熱啟動酶：

圖5 圖6
圖5為熱啟動方式下的PCR產物電泳結果；圖6為傳統啟動方式下的PCR產物電泳結果，兩種啟動方式下的反應的體系及條件均一致。
從圖中可見，熱啟動方式比傳統啟動方式下的PCR產物的電泳結果較為理想，目的條
帶清晰且亮度明顯，非特異性產物明顯減弱。