什么是免疫PCR(immunoPCR)?
1.定義:免疫-PCR(immuno-PCR)它利用抗原-抗體反應的特異性和PCR擴增反應的極高靈敏性來檢測抗原,尤其適用于極微量抗原的檢測。是新近建立的一種靈敏、特異的抗原檢測系統。主要步驟有三個:①抗原-抗體反應,②與嵌合連接分子結合,③PCR擴增嵌合連接分子中的DNA(一般為質粒DNA)。 2.嵌合連接分子的制備原理:其基本原理與ELISA和免疫酶染色相似,在免疫-PCR中,嵌合連接分子起著橋梁作用,它有兩個結合位點,一個與抗原抗體復合物中的抗體結合,一個與質粒DNA結合,在操作反應中形成抗原抗體-連接分子-DNA復合物,通過PCR擴增DNA 來判斷是否存在特異性抗原.是免疫-PCR。與ELISA不同之處在于其中的標記物不是酶而是質粒DNA。 3.優點為:①特異性較強,因為它建立在抗原抗 體特異性反應的基礎上。②敏感度高,PCR具 有驚人的擴增能力,免疫PCR比ELISA敏感度高 105倍以上,可用于單......閱讀全文
什么是數字PCR?
?數字PCR技術也稱為第三代PCR技術,是一種核酸高靈敏檢測和絕對定量的新方法。同傳統的PCR相比,數字PCR增加了對反應體系進行分隔(Partition)的操作,將幾十微升的反應體系分隔成了數萬微小獨立反應體系,核酸模板在這種分隔過程中被充分稀釋,理想狀態下每個微滴中含有1個分子的核酸模板,擴增完
什么是PCR陰性?
舉乙肝的例子來說:通過酶免的方法查乙肝兩對半和通過熒光定量PCR的方法學查乙肝DNA小明得了肝炎,但他不知道自己得了肝炎,有一天身體不舒服或者正常體檢(比如入職體檢),他去看醫生,臨床醫生懷疑他得了肝炎(肝炎有很多種比如病毒性肝炎,也就是病毒傾入他體內后由于人體的三道防線沒能把病毒消滅掉,導致病毒在
什么是重組PCR?
重組 PCR(recombinant PCR,R-PCR)可用 PCR 法在 DNA 片段上進行定點突變,突變的產物(即擴增物)中含有與模板核苷酸序列相異的堿基,用 PCR 介導產生核苷酸的突變包括堿基替代、缺失或插入等。如圖1所示,重組 PCR 操作需要2對引物:“左方”PCR 的一對引物為 a
什么是PCR假陰性?
假陰性是指不出現特異擴增帶。可能原因:引物設計不合理,酶失活或酶量不足,模板量太少,退火溫度不合適,循環次數過少,產物未及時電泳檢測等。解決方法有:重新設計引物,增加酶量或調換酶,增加模板量,調整退火溫度,增加循環次數,及時檢測擴增產物,一般在 48h 以內進行。
什么是熒光定量PCR?
DNA有著雙螺旋結構,當溫度達到95攝氏度時,雙鏈的DNA會分解成為單鏈狀態,而在溫度到達72攝氏度左右時,DNA聚合酶會沿著磷酸到五碳糖的方向進行合成。聚合酶鏈反應PCR就是通過不斷地調節溫度,以數量級的速度增加DNA數量的方法。而實時熒光定量PCR是指,在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信
什么是普通PCR技術?
Kary Mullis于1983年發明了聚合酶鏈式反應法(polymerase chain reaction ,PCR),據說是載著女友開車的時候,忽然靈光一閃,想到了PCR原理(論開車的好處)。Kary Mullis于1993 年獲諾貝爾化學獎。《紐約時報》如此評價:" 具有高度原創性和重大意義,
什么是熒光PCR檢測
熒光定量PCR是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。原理: PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探
什么是PCR假陽性?
假陽性是指出現的 PCR 擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。產生的原因有:①引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行 PCR 擴增時,擴增出的 PCR 產物為非目的序列;②靶序列太短或引物太短;③靶序列或擴增產物的交叉污染。解決方法有:操作輕柔,防止
什么是梯度PCR儀
把一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常有12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴增的不同DNA片段,其最適退火溫度是不同的,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增,就可以篩選出表達量高的最適退火溫度,進行有效的擴增。主要用于研究未知D
什么是反向-PCR?反向-PCR的特點
常規 PCR 是擴增兩引物之間的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物來擴增兩引物以外的 DNA 片段。一般先用限制性內切酶酶解 DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點,且片段應短于2~3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環化,最后用一對反向引物進行 PCR,得到
什么是免疫[力]?
中文名稱免疫[力]英文名稱immunity定 義機體抵抗感染的能力。應用學科免疫學(一級學科),概論(二級學科),免疫學相關名詞(三級學科)
什么是免疫防御?
免疫防御(immunologic defence)是指免疫系統通過正常免疫應答,阻止和清除入侵病原體及其毒素的功能,即抗感染免疫作用。
什么是免疫應答?
免疫應答(IR)是指機體受抗原刺激后,免疫細胞對抗原分子識別、活化、增殖和分化,產生免疫物質發生特異性免疫效應的過程。這個過程是免疫系統各部分生理功能的綜合體現,包括了抗原遞呈、淋巴細胞活化、免疫分子形成及免疫效應發生等一系列的生理反應。
什么是免疫忽視?
因T細胞克隆的TCR隊組織特異自身抗原親和力低,或這類自身抗原濃度很低,經APC提呈,不足以活化相應的初始T細胞,而致自身應答T細胞克隆與相應組織特異抗原并存。
什么是細胞免疫
細胞免疫又稱為細胞介導免疫。狹義的細胞免疫,僅僅是指t細胞介導的免疫應答,也就是t細胞受到抗原刺激以后,分化,增值轉化為致敏的t細胞,當相同的抗原再次進入機體,致敏的t細胞對抗原的直接殺傷作用,以及致敏的t細胞所釋放的細胞因子的協同殺傷作用。t細胞介導的免疫應答的特征,是出現以單核細胞浸潤為主的
什么是感染免疫?
感染免疫是指人的免疫力隨結核分枝桿菌或其成分在體內存在而存在。
什么是免疫細胞?
免疫細胞是指參與免疫應答或與免疫應答相關的細胞。包括淋巴細胞、樹突狀細胞、單核/巨噬細胞、粒細胞、肥大細胞等。免疫細胞可以分為多種,在人體中各種免疫細胞擔任著重要的角色。免疫細胞(immune cell)俗稱白細胞,包括先天性淋巴細胞、各種吞噬細胞等和能識別抗原、產生特異性免疫應答的淋巴細胞等。
什么是免疫記憶?
免疫記憶(immunological memory )。在獲得性免疫方面,一度對某抗原發生反應,則在下一次同樣的抗原刺激時,可看到更強烈的反應,稱為免疫記憶。
什么是計劃免疫?
計劃免疫是指有計劃地進行預防接種。其措施是根據人群的免疫狀況和傳染病的流行情況,以及各種生物制品的性能和免疫期限,科學地安排接種對象和時間。小兒計劃免疫是根據兒童的免疫特點和傳染病發生的情況制定的免疫程序。利用安全有效的疫苗,對不同年齡的兒童進行有計劃地預防接種,可以提高兒童的免疫水平,達到控制和消
什么是免疫缺陷?
免疫缺陷是一種由于人體的免疫系統發育缺陷或免疫反應障礙致使人體抗感染能力低下,臨床表現為反復感染或嚴重感染性疾病。
什么是免疫防御?
免疫防御(immunologic defence)是指免疫系統通過正常免疫應答,阻止和清除入侵病原體及其毒素的功能,即抗感染免疫作用。中文名免疫防御外文名immune defense定義如果免疫應答表現過于強烈,則在清除抗原的同時,也會造成組織損傷,即發生超敏反應(變態反應)。如免疫應答過低或缺如,
什么是免疫細胞?
免疫細胞(英語:immunocyte)廣義上泛指所有參與免疫應答或與免疫應答相關的細胞,主要是所有的白細胞及非白細胞的抗原呈遞細胞(如內皮細胞);狹義上特指能識別抗原,產生特異性免疫應答的淋巴細胞。
什么是伴隨免疫?
人感染血吸蟲后可獲得部分免疫力,患者門靜脈內仍有成蟲寄生和產卵,但宿主對再感染有一定免疫力,而無損于體內的成蟲,這種免疫稱為伴隨免疫。
什么是免疫突觸?
T細胞突觸即免疫突觸。成熟T細胞在與APC識別結合的過程中,多種跨膜分子聚集在富含神經鞘磷脂和膽固醇的“筏”狀結構上并且互相靠攏成簇,形成細胞間互相結合的部位,其中心區為TCR和抗原肽-MHC分子,以及T細胞膜輔助分子和相應配體,周圍環形分布著大量的其它細胞粘附分子。
PCR儀是個什么儀器
PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一
什么是不對稱PCR?
不對稱PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一對引物,PCR擴增后產生大量的單鏈DNA(SSDNA)。這對引物分別稱為非限制引物與限制性引物,其比例一般為50——100:1。在PCR反應的最初10——15個循環中,其擴增產物主要是雙鏈DNA,但當限制性引物(低濃度引物)消耗完后,非限制性
什么是實時熒光定量PCR
實時熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術,它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結
什么是菌落pcr假陽性
利用菌落作為模板進行PCR擴增,驗證該菌落里是否帶有目標片段。但是由于PCR是一個級聯放大的過程,所以即使菌落中不含有目標片段,而是菌落表面沾有一部分之前連接,轉化中用的目標DNA,也會導致PCR獲得擴增條帶,從而誤認為這個菌落已經帶有了目標片段,稱之為假陽性。可以通過提質粒酶切,或者測序驗證,排除
什么是PCR熔解曲線法
PCR熔解曲線分析法是做realtime-pcr時分析,用來確定不同的反應產物,包括非特異性產物的分析方法。原理是在擴增反應完成后,通過逐漸增加溫度的同時監測每一步的熒光信號來產生溶解曲線,隨著反應中雙鏈DNA變性,熒光染料又回復到游離狀態導致熒光信號降低,用熒光信號改變的負的一次導數與溫度作圖,在
什么是多重PCR核酸檢測
?一般的PCR反應僅應用一對引物,通過PCR擴增對單個基因序列進行復制,主要用于單一靶標的檢測。多重PCR (Multiplex PCR),是在同一PCR反應體系里加上兩對或以上的引物,同時進行多個基因的擴增檢測。? ? 多重PCR反應最常見的類型是雙重反應。在一定情況下,為了能夠同時檢測多個靶標基