由于多發內分泌腺病中胃泌素瘤體積小，其定位診斷較困難，CT及磁共振可檢出肝轉移性病灶，但對胃泌素瘤往往難以確診，進一步定位方法包括內鏡超聲、選擇性動脈注射胰泌素后肝靜脈采血測胃泌素以及放射性核素標記奧曲肽掃描。必要時可作胰泌素（secretin）興奮試驗，胃泌素瘤患者血漿胃泌素升高。
多發內分泌腺病Ⅰ型中胰島素瘤亦常為多中心性，定位亦較困難，內鏡超聲檢查、選擇性滴注鈣劑后肝靜脈采血測胰島素等有助于定位。
在一些家族中，現在已能用DNA限制段長度多形分析遺傳篩選確定遺傳攜帶者，其正確率達99.5%。從15歲起每年定期進行篩選遺傳基因攜帶，內容包括提示性癥狀的患者的病史；消化性潰瘍，腹瀉，腎結石，低血糖和垂體功能減退以及檢查視野缺損，肢端肥大癥和皮下脂肪瘤；測血清鈣，完整甲狀旁腺激素，胃泌素和催乳素。必要時，作附加實驗室和診斷試驗，垂體CT或磁共振亦應進行。