使用激光光源進行NIRwesternblot檢測的優勢
簡介Western blot方法是生物實驗室常用的蛋白檢測方法之一，自從1979提出至今已有數十年的歷史。用于分析蛋白的表達情況。通過抗原抗體的特異性結合來檢測靶標蛋白，常用的檢測方法有化學發光法和熒光方法。熒光檢測方法由于可以進行多重檢測且信號穩定，越來越受到大家的青睞。二抗直接標記熒光基團，熒光信號強度和目標蛋白濃度成比例關系，而不依賴于酶促反應，定量更準確。NIR近紅外熒光檢測方法，印跡膜自發熒光較低，信噪比高。NIR熒光檢測能獲得高信噪比和高質量圖片主要依賴于激發強度大，精密的激光光源和專業的光學元件。激光光源相比于LED、氙燈/鹵素燈更容易達到染料的吸收峰在成像系統中,光源的選擇基于其激發特定染料的能力，選擇光源的標準是找到一個可以傳遞必要能量的可用激發光（實際激發熒光探針的光），同時又可最小化錯誤波長光浪費的標準。激光光源近紅外成像的最大優勢在于更接近普通染料的激發峰。例如染料 IR Dye? 700 和Alex......閱讀全文
HPV16檢驗中捕獲LAMP產物的方法
2020年6月3日，由Lena Landaverde等在《Analytical and Bioanalytical Chemistry》期刊中發表了《Method for the elucidation of LAMP products captured on lateral flow stri
HPV16檢驗中捕獲LAMP產物的方法
2020年6月3日，由Lena Landaverde等在《Analytical and Bioanalytical Chemistry》期刊中發表了《Method for the elucidation of LAMP products captured on lateral flow st
近紅外Western－Blot實驗需要關注的5個重點
化學發光Western Blot的流程大家再熟悉不過，近紅外熒光Western與化學發光步驟基本相似，但是有些小伙伴做不好熒光Western，小編給大家總結了做熒光Western的幾點注意事項：一、做近紅外熒光Western選擇低熒光背景膜，降低膜對信號的影響。二、選擇合適的封閉液，沒有一種封閉液適
近紅外Western－Blot實驗需要關注的5個重點
化學發光Western Blot的流程大家再熟悉不過，近紅外熒光Western與化學發光步驟基本相似，但是有些小伙伴做不好熒光Western，小編給大家總結了做熒光Western的幾點注意事項： 一、做近紅外熒光Western選擇低熒光背景膜，降低膜對信號的影響。 二、選擇合適的封閉
Western－Blot實驗（一）
大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，
Western－Blot詳解（八）
DDDD.顯色目的條帶又細又淺，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，應該是高表達。每個涌道上50-70μg蛋白，開始用半干轉移，后來用濕轉14v，16h，用PVDF膜轉移。膠轉移后染色檢測，發現小分子量的基本轉移走了，可是為什么條帶老是不粗不濃呢?解答：可能跟你的一抗有關
Western－Blot詳解－原理
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。?原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢
Western－Blot實驗（二）
小巧的體格，卻一應俱全，可以靈活控制多種應用程序，包括化學發光，熒光，DNA/蛋白膠。可以滿足對實驗室各種樣品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可進行Cy3, Cy5, Cy2 多色熒光LED成像，又可在700和800nm處進行近紅外激光定量熒光western 成像系統。這達到對成像最完美
Western－Blot詳解（六）
GGG.我想盡量提高轉膜的效率（我的實驗要求轉到膜上的蛋白越多越好，不管是什么大小蛋白）不知道有那些辦法？解答：不管怎么轉都會存在蛋白轉移不完全（電壓過小時間過短）或過度轉移（電壓過大時間過長）的問題，魚（小分子量蛋白）和熊掌（大分子量蛋白）不可得兼呵呵。建議把膠切成兩半，比如以35KD為界，分別進
Western－Blot詳解（一）
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術:一、原理二、分類i.放射自顯影ii.底物化學
Western－Blot操作步驟
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southe
Western－Blot詳解（三）
3.抗體T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的ELL+plus試劑盒顯色。轉膜過夜，
Western－Blot詳解（五）
CCC.Western Stripping Buffer的配方解答：METHOD11、stripping buffer: 62.5mmol/l Tris PH6.7；100mmol/l beta-mercaptoethanol；2%SDS二次發光protocol:1.stripping buffer
Western－Blot詳解（二）
11、NaN3 0.02% 疊氮鈉(有毒，戴手套操作)，溶于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。12、Tris緩沖鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)，500mmol/LnaCl。13、Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。14、過氧化物酶標記的第二
Western－Blot實驗步驟
實驗步驟： 1.分別配制 5%濃縮膠和12%分離膠 12%分離膠10mL 5%積層膠6mL H2O 3.3mL H2O 4.20mL 30% Acrylamide 4mL 30% Acrylamide 1mL pH8.8 Tris HCl（1.5M） 2.5mL PH6.8Tris
Western－Blot詳解（七）
TTT.目的蛋白是一種6KD的分泌性蛋白，RT－PCR就顯示細胞中mRNA表達不高，估計將培養上清凍干濃縮后采用Western Blot還可能檢測不出，但如果用western，是否一定要用0.2μm的膜？用Tris-tricine SDS－PAGE電泳，電泳時分別管制三層凝膠，分離膠用40％
western－blot試驗心得
前兩天做了一個western blot,現在把試驗中的一點小小的體會發上來，與大家交流，希望大家多多指點！1 本實驗室采用的脫脂奶粉已經存放了近兩年了，雖然是四攝氏度保存，但是其封閉質量還是難以保證的。所以本人的試驗結果中出現了小斑點。建議最好使用BSA或專用的脫脂奶粉進行封閉，雖然貴點，但還是有個
Western－Blot－with－Platelet－Protein
OUTLINEWestern blot is a wide used technique to identify a target protein/s for the certain antibody.PROTOCOLPrepare platelets.Lyse washed platelets (
Western－Blot操作步驟
背景： 蛋白質印跡的發明者是斯坦福大學George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被稱為Western Blot。最開始做印跡的是一個叫Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術
Western－Blot詳解（四）
還有一種離子交換型膜是羧甲基（CM）修飾的纖維素膜，它可以結合蛋白和多肽分子，以及其他的一些帶正電荷的樣品，最適結合pH范圍在4-7。結合的多肽分子可以從CM膜上洗脫下來，用于氨基酸系列分析或微測序。5.Marker的相關疑問MM.我用的是可視marker（BIO_RAD），但是電泳總跑不全8條帶，
Western－Blot詳解（三）
3.抗體 T.做細胞信號傳導，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：對二抗無要求，要看你實驗條件來選擇，一般推薦用HRP標記的二抗。 U.同一公司的另外抗體用這個稀釋度做出來效果很好，所以沒做預試，怕費時間，用什么樣的稀釋度比較好呢？我用的E
western－blot－marker的作用
電泳后會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以：1 在SDS-PAGE中監測蛋白的遷移；2 確認轉膜效率；3 根據marker的條帶估計分子量；4 確定目的蛋白位置.
western－blot－marker的作用
電泳后會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以：1 在SDS-PAGE中監測蛋白的遷移；2 確認轉膜效率；3 根據marker的條帶估計分子量；4 確定目的蛋白位置.
western－blot－marker的作用
電泳后會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以：1 在SDS-PAGE中監測蛋白的遷移；2 確認轉膜效率；3 根據marker的條帶估計分子量；4 確定目的蛋白位置.
western－blot－marker的作用
電泳后會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以：1 在SDS-PAGE中監測蛋白的遷移；2 確認轉膜效率；3 根據marker的條帶估計分子量；4 確定目的蛋白位置.
western－blot的條帶分析
你的對照組是什么？對照組有沒有出現問題？有問題的話是很可能是你在操作過程中有問題膜的質量是否有問題？
western－blot－marker的作用
電泳后會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以：1 在SDS-PAGE中監測蛋白的遷移；2 確認轉膜效率；3 根據marker的條帶估計分子量；4 確定目的蛋白位置.
western－blot－marker的作用
電泳后會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以：1 在SDS-PAGE中監測蛋白的遷移；2 確認轉膜效率；3 根據marker的條帶估計分子量；4 確定目的蛋白位置.
western－blot的實驗原理
蛋白免疫印跡（Western blotting 或 Immunoblotting）一般由凝膠電泳、樣品的印跡和免疫學檢測三個部分組成。第一步是做 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質按分子量大小在凝膠中分成帶。第二步把凝膠中已分成條帶的蛋白質轉移到一種固相支持物上， 用得最多的材料是硝酸
western－blot的實驗原理
Western Blot與Southern印跡雜交或Northern印跡雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品(跑PAGE 膠的原理你懂吧~~~)，轉移到固相載體（硝酸纖維素膜NC膜）上