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  • 發布時間:2017-11-13 16:03 原文鏈接: ScientificReports:一種提高轉染效率的簡便方法

       對于一個成功的細胞生物學實驗來說,轉染那是必不可少的。通常比較受歡迎的方法是利用陽離子脂質體或聚合物來轉染。這些試劑與DNA形成絡合物,進而壓縮DNA使其被細胞內吞。它們的正電荷有助于克服帶負電荷的DNA骨架與細胞膜之間的排斥。

      與病毒和物理方法相比,化學轉染方法雖然簡便經濟,但效率不高,毒性較大,而且對3D細胞培養的效果不理想,因為試劑無法接觸到內部的細胞。如今,威斯康星大學麥迪遜分校的研究人員將轉染試劑與礦物質包被的微粒(MCM)相結合,提高了DNA轉染的效率。

      這項研究由William Murphy領導。他的團隊之前已證實,利用細胞培養底物的礦物質包被,他們能提高原代細胞的轉染效率。這讓他們想到,MCM也許能夠更好地與DNA復合物結合,從而提供轉染效率。

      于是,研究人員將包被了磷酸鈣的微粒添加到質粒DNA與陽離子脂質體的復合物中。他們發現,當這種復合物轉染2D培養的人原代成纖維細胞時,轉染效率較原先提高了4倍。剖析這背后的原因,礦物質包被起了很大的作用。

      在提高轉染效率的同時,MCM介導的化學轉染也大大提高了細胞存活率。在實驗中,利用最高濃度的質粒DNA轉染時,細胞存活率只有20%,而在添加MCM之后,細胞存活率上升到70%左右。

      研究人員發現,MCM也能提高反向轉染的效率。對于某些難以轉染的細胞,如人胚胎干細胞(hESC),這種方法的效果要優于常規的轉染。

      對于細胞聚集物的3D培養模型,質粒DNA與陽離子脂質體的復合物的轉染效果不佳。不過,當這種復合物經MCM處理后,再與細胞混合然后聚集,所產生的聚集物表現出均一的GFP表達。

      考慮到礦物質包被在提高化學轉染效率上發揮積極作用,研究小組計劃對包被的組成開展進一步的研究,以了解在轉染過程中如何增強對DNA脂質體復合物的吸收和呈遞能力。

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