1．目的
學會PCR操作的基本技術。
2．原理
是將待擴增的DNA模板加熱變性，與其兩側互補的寡聚核苷酸引物復性，然后經過耐熱的DNA聚合酶延伸。再進入下一輪變性—復性—延伸的循環，n次循環后DNA可被擴增（1+X）n倍。其中<25nt的引物退火溫度Tm=2（A+T）+4（G+C）。
3．器材
旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，0.2ml PCR微量管，雙面微量離心管架，PCR儀，臺式離心機，瓊脂糖凝膠電泳系統，水漂，恒溫水浴。
4．試劑
5U/μl Taq DNA聚合酶，PCR緩沖液（10×，MgCl2 free），25mM MgCl2，dNTP，引物，模板質粒pBS-CHI，無菌ddH2O。
5．實驗準備
dNTP混合液（每種25mM），TAE電泳緩沖液，熒光染料，10′加樣緩沖液，1.5ml離心管裝入鋁制飯盒（滅菌）、移液器吸頭裝入相應的吸頭盒（滅菌）。合成的引物：Sense primer 5＇-GGATCCACAATGATGAGAGCC-３＇
Antisense primer ５＇-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-３＇
目的基因模板質粒：已經克隆在pBS載體上的1128bp幾丁質酶（chitinase，CHI）基因。
待擴增的CHI片段長度：996bp。
6．操作步驟
（1）在0.2ml PCR 微量離心管中配制50μl反應體系。（以下加樣量供參考，括號內是最終需要量，實驗時需參照Taq酶說明書計算）
ddH2O 32μl
10×PCR buffer（不含MgCl2） 5μl
25mM MgCl2 3μl
2.5mmol/L dNTP 4μl（每種dNTP終濃度0.2mM）
10μmol/L Primer1 2μl（12.5~25pmoles）
10μmol/L primer2 2μl（12.5~25pmoles）
模板質粒 1μl（1×10-3pmoles）
5U/μl Taq酶 1μl（5U）
總體積 50μl
（2）根據廠商的操作手冊設置PCR儀的循環程序：
① 94℃ 5min
② 94℃ 1min
③ 54℃ 1min