LCMS技術臨床應用培訓班報告（一）

發布時間：2016-04-20 21:36 原文鏈接： LCMS技術臨床應用培訓班報告（一）

　　分析測試百科網訊2016年4月20日，液相色譜-質譜（LC-MS）技術臨床應用培訓班在上海中山醫院舉辦。復旦大學附屬中山醫院檢驗科主任潘柏申教授、紐約州羅徹斯特大學臨床質譜實驗室主任兼北美華人臨床化學學會（NACCCA）主席張巖教授、南卡羅來納州醫學院臨床化學和毒理學主任兼北美華人臨床化學學會（NACCCA）前任主席朱玉勝教授和克利夫蘭醫療中心臨床生化主任及醫學總監王思合教授等多名液相色譜-質譜領域專家帶來了精彩的報告。液相色譜-質譜和臨床應用方面近百名專家學者共聚一堂，共同探討LC-MS在醫學檢驗中的應用。

復旦大學附屬中山醫院檢驗科主任潘柏申

　　潘柏申：復旦大學附屬中山醫院檢驗科主任，中華醫學會檢驗醫學分會主任委員，國家衛生標準委員會臨床檢驗標準專業委員會副主任委員。

培訓班現場

紐約州羅徹斯特大學臨床質譜實驗室主任兼北美華人臨床化學學會（NACCCA）主席張巖

　　張巖：紐約州羅徹斯特大學臨床質譜實驗室主任，病理和臨床醫學系副教授，美國臨床化學學會（AACC）質譜和分離分委會主席，北美華人臨床化學學會（NACCCA）主席。

　　紐約州羅徹斯特大學臨床質譜實驗室主任兼北美華人臨床化學學會（NACCCA）主席張巖介紹了《液相色譜與液相色譜-質譜聯用技術的基本構架及原理》。在液相色譜方面，張巖主要對液相色譜的組成及各個部件和液相分離等方面做了詳細的分析。

　　在檢測器方面，張巖介紹到了紫外檢測器，她表示紫外檢測器易于使用、相對于質譜較便宜，但缺點是量化所有的復合物，不能區分不同種類，如色氨酸和酪氨酸。質譜的出現填補了這一空白，質譜由于它的高特異性，在臨床應用上獲得了很多的關注。質譜由離子源、質量分析器和檢測器三部分組成，其中離子源方式包括電噴霧電離、大氣壓化學電離和基質輔助激光解析電離等，質量分析器包括四極桿、飛行時間和軌道離子阱等。張巖表示三重四極桿是最常用的質譜儀，掃描方式包括全掃描、單掃描、子離子掃描、母離子掃描、中性粒子丟失和MRM-多反應監測等。在維生素D的檢測中，一般采用MRM方式，

南卡羅來納州醫學院臨床化學和毒理學主任朱玉勝

　　朱玉勝：南卡羅來納州醫學院臨床化學和毒理學主任，臨床生物化學國家科學院（NACB）成員，美國臨床化學學會（AACC）質譜和分離分委會成員，北美華人臨床化學學會（NACCCA）前任主席。

　　南卡羅來納州醫學院臨床化學和毒理學主任朱玉勝介紹了《液相色譜串聯質譜技術（LC-MS/MS）基本操作》。液相色譜串聯質譜的操作包括樣品的制備、樣品檢測和結果報告三個步驟。樣品的制備常規采取萃取技術，包括稀釋進樣、蛋白沉淀、液液萃取和固液萃取等，樣品檢測中液相色譜串聯質譜通常采用緩沖溶液和有機相為流動相，通過脫氣處理。做好標準曲線，確定內標物，進行質量控制。

　　朱玉勝介紹在結果報告前需檢查質控、標準曲線、離子比例、內標、保留時間和峰形等。

　　朱玉勝還介紹了《液相色譜-串聯質譜技術檢測（LC-MS/MS）的儀器維護與故障排除》。

　　在HPLC方面的故障主要有，壓力：太低（漏）或者太高（堵）；前后流速不一致：保留時間和梯度的偏移；管路：死體積過大，混勻的不完全等。

　　在MS方面的故障，朱玉勝介紹了如何解決質譜前端（轉化區域）和MS-1的污染，導致通常會有信號逐漸丟失或者高的基線水平；氣源供應或者排氣管路中斷會產生錯誤信息；加熱器故障；電子故障；孔口的堵塞；離子源沒有識別；管路沒有連接在源上；質量校準或調試中的偏移；真空泄漏；老化的檢測器導致敏感度的下降；信號突然丟失，或者錯誤信息，或者兩者同時出現；信號逐漸丟失；MS/MS靈敏度的下降等問題。

　　另外，朱玉勝還建議一個批次/切換/一天結束后清洗柱和色譜系統；當LC關閉時，在室溫環境下，讓系統處于高百分比的有機相（咨詢LC供應商；LC色譜柱的產品供應商）不要使用緩沖液或者酸。周/月/周期性使用維護，有機試劑來沖洗強的殘留的，非極性的成分（磷脂和其他脂類）；電腦維護；管路修復（管路，配件，預濾器保護柱，色譜柱）；質譜源部件的改變（比如電極）；MS/MS的清潔需要排氣（詢問供應商）。

克利夫蘭醫療中心臨床生化主任及醫學總監王思合

　　王思合：克利夫蘭醫療中心臨床生化主任及醫學總監，美國臨床化學學會（AACC）轉化醫學部門主席，臨床化學鑒定委員會（ComACC）主席，北美華人臨床化學學會（NACCCA）前任主席。

　　克利夫蘭醫療中心臨床生化主任及醫學總監王思合介紹了《液相色譜-串聯質譜技術（LC-MS/MS）在臨床小分子定量檢測中的應用》。

　　王思合表示LC-MS/MS在臨床應用中可用于新生兒疾病篩查、先天性代謝缺陷、毒理學檢測以及濫用藥物檢測、止痛藥物的檢測、治療藥物監測、內分泌物質和蛋白質鑒定以及定量檢測等。相比與免疫學方法，LC-MS/MS在定量檢測患者樣品中的小分子物質具有明顯的優勢：具有高特異性、高靈敏度（<1pg/ml）、適用范圍廣泛、檢測的靈活性和檢測信息豐富。但是運用LC-MS/MS也面臨著挑戰，如掌握起來比較困難、需要自建系統、檢測通量受條件的限制（分析周期、樣品前處理、批量分析和與實驗室信息系統的接口）、沒有強大的服務支持等。

　　王思合介紹到維生素D營養狀態評測實驗，LC-MS/MS檢測血清中25(OH)D，使用乙腈沉淀蛋白，梯度洗脫，在正離子模式下，檢測到25(OH)D3,401.3-383.2m/z, 25(OH)D2,413.3-395.0m/z, d6-25(OH)D3,407.3-389.2m/z。

　　王思合表示LC-MS/MS在臨床實驗室的應用前景還有很多，比如：自動化前處理（條碼閱讀器和非人工提取）；減少試劑消耗，低流量LC與MS聯用，提高敏感性與檢測速率；減少錄入錯誤，將樣品前處理、LC-MS/MS和LIS連接起來；改善實驗室間檢測結果的互通性、日常穩定性優化及繁重的維護工作；改善使用者的體驗；減少故障停機時間，改善檢測的有效性。

　　王思合還介紹了《實驗室質譜檢測的人員與設備要求》。他介紹了CLIA’88（臨床實驗室改進修正案）條例，CLIA’88主宰了臨床實驗室對于人員的特殊要求。

　　在臨床質譜實驗室中的工作人員需要特殊的教育和培訓，王思合還介紹了實驗室主任的資格及職責，技術主管的資格及職責，臨床顧問的資格及職責，總主管的資格及職責，檢測人員的資格及職責和團隊合作精神的重要性。

　　設備方面，王思合表示設備需要充足空氣流通的空間-嚴格的濕度和溫度控制；充足和穩定的電力供應；提供最小震動的穩定的工作臺面；用于制備校準品分析儀器等；冰箱和用于樣本和標準品的儲存冷藏空間；樣本制備時使用的化學安全頭罩；有機試劑的儲存；廢棄物管理；質譜產生的有毒物質處理機制；有效的MS產生噪音的降低。