Gel filtration的基本原理，現在談談我裝柱子的過程。我們用的是Amersham 的 XK26/40的空柱子，然后往里面填充Sephacryl S-300 HR 的resin。按道理說，要提高分辨率，柱子應該是越長越細才好，這種柱子雖然不短，但是挺粗的。但是一個好處就是，樣品體積可以大一些。
裝柱子本身就是一件很tricky的事情，以至與這課的教程上專門列了一小節來解釋怎么裝柱子。我們這一組人中，我負責裝柱子。一開始就是洗resin了，用粗制燒結玻板過濾的漏斗來洗，感覺這方法還挺快的。洗完了，就把resin重懸成50%的slurry，然后就是往柱子里頭倒了。但是呢，有一個小竅門，就是必須先封閉柱子的下出口，往柱子里面倒10%體積的buffer。我過去裝柱子犯傻，不知道要這么做，結果發現下面的resin 不均勻不說，還有一大堆氣泡。所以先加buffer是很必要的。倒slurry的時候還得用玻棒引流，這樣可以盡可能的避免氣泡。然后就是等了，等resin 沉降３０分鐘后，就可以打開柱子的下出液口，讓多余的緩沖液流出去。液面低到靠近柱面的時候呢，就可以把上端液流接頭接到柱子上方。這個過程最麻煩了，主要是不能引入氣泡，所以先得讓這個接頭裝置里面充滿緩沖夜，把氣泡趕出來。我第一次做沒經驗，費了九牛二虎之力才搞定了。然后就是接上蠕動泵(peristaltic pump) 加壓，讓resin繼續緊縮一下。隨著柱面的下降，接頭裝置還得不斷往下移動，使得接頭剛剛好與柱面接觸。接觸不緊密的話，等于是沖淡了樣品，分辨率會降低。
柱子裝好了，但還不能開始跑樣品。為什么呢？因為這種柱子的質量必須很好才能起到分離蛋白的效果，否則是根本沒法work的。所以呢，首先得測試這個柱子是否真的裝好了。測試過程很簡單，就是跑一下藍色葡聚糖(blue dextran)，藍色葡聚糖是帶有藍色染料的多糖高分子聚合體，體積非常大，所以在空體積(void volume)就會洗脫出來。跑藍色葡聚糖可以起到三個目的。第一個就是確定void volume，知道這個空體積是很重要的。因為每次裝柱子，實際resin的總體積都會有微小的不同。特定蛋白在柱子的洗脫體積與空體積的比值是一定的，所以只要知道了空體積，就能知道蛋白大概會在什么時候洗脫出來。第二個就是確定樣品會被稀釋多少。第三個呢，是柱子是否裝的均勻。如果裝的不均勻，葡聚糖j就會跑得形狀怪異。一般來說呢，柱子下端堆積會比上端均勻，為了分辨度好，應該從更均勻的一端上樣。所以我們在做的時候，是從下端上樣的。
忙活了半天，當所有裝置都裝好的時候，感覺還是挺興奮的。首先是蠕動泵，然后是柱子，然后是UV monitor加記錄儀。整套裝置不貴，功能卻很齊全。