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  • 發布時間:2020-04-21 19:14 原文鏈接: EB染色液使用說明

    產品簡介:

    EB染色液是EB的水溶液,濃度為10mg/ml。EB(溴化乙錠)能與核酸分子特異結合,用于觀察瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中DNA或RNA分子。廣泛應用于核酸電泳前后的染色以及流式細胞儀的樣品染色處理等。溴化乙錠(Ethidium Bromide;C21H20N3Br;分子量為394.32)含有一個可以嵌入DNA 堿基的三環平面基團。它與DNA 的結合沒有堿基序列特異性。大約每2.5 個堿基插入一個溴化乙錠分子。當染料分子插入后,紫外激發后呈現熒光,可以檢測到10ng 的DNA 條帶。

    ● 保存條件:

    室溫避光保存。

    ● 注意事項: 

    EB有一定毒性,使用時請使用一次性手套操作,注意防護!

    ● 使用說明:

    使用前,先離心快甩EB溶液至管底,以防開蓋后EB造成的污染。

    瓊脂糖電泳凝膠的制備及染色(預染法):

    1.按照所需濃度稱取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱至徹底溶解。

    2.等凝膠溫度降至大約50-60℃以下時,加入10 mg/ml EB溶液至終濃度為0.5μg/ml (如100ml凝膠加入EB量為5μl);徹底搖勻后鋪膠并插入梳子。

    3.凝固后,將梳子輕輕拔出。

    4.上樣電泳,電泳結束后紫外觀察。

    瓊脂糖電泳凝膠的制備及染色(后染法):

    1.按照所需濃度稱取瓊脂糖,加入TAE或TBE緩沖液,在微波爐中加熱至徹底溶解。

    2.等凝膠溫度降至大約50-60℃以下時,不要加入EB溶液,直接鋪膠并插入梳子。

    3.凝固后,將梳子輕輕拔出。

    4.上樣電泳。

    5.電泳結束后將凝膠浸泡在含有EB的TAE或TBE染色液中(染色液配制:100ml 緩沖液中加入150-200 μl EB溶液,混勻)染色15-20分鐘;TAE或TBE緩沖液中脫色10-15分鐘。

    6.紫外觀察結果。


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