實驗概要
1、了解Feulgen反應的基本原理。
2、熟悉傳統細胞化學實驗的基本實驗技能和操作方法。
實驗原理
Feulgen反應是1924年由Feulgen和Rossenbeck開創的。這一反應的原理是：DNA經酸（1mol/LHCL）水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑（無色品紅亞硫酸溶液）反應，形成紫紅色的化合物，使細胞內含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應。所以，凡有DNA的部位，會呈現紫紅色陽性反應，可以作為定性研究DNA的一種簡便方法。紫紅色的產生，是由于反應產物的分子內含有醌基，醌基是一個發色團，所以具有顏色。對照組預先用熱三氯醋酸或DNA酶處理，抽提去細胞中的DNA而得到陰性反應，從而證明了Feulgen反應的專一性。
主要試劑
1、Carnoy固定液：3份95%酒精加入1份冰醋酸，混合即可。
2、1mol/LHCL：準確量取82.5ml濃鹽酸（比重1.18）加蒸餾水到1000ml即可(應將鹽酸緩緩加入水中)。
3、Schiff試劑：稱1g堿性品紅于200ml煮沸的重蒸餾水中，5分鐘后斷電使其冷卻至55～50℃，過濾到一個棕色的試劑瓶中，加入1mol/L HCl 20ml，繼續冷卻至25℃，加入1g偏亞硫酸氫鈉，搖動瓶子使其溶解。密閉瓶口，置黑暗低溫處或冰箱內（4℃左右），18～24小時后檢查，試劑如透明無色或呈淺黃色時即可使用，這就是Schiff試劑溶液。如有不同程度的紅色未褪，可加入1g活性炭，強烈震蕩一分鐘，仍在低溫下靜置過夜，然后用濾紙過濾后使用。密封瓶口，包以黑紙，在5℃以下冰箱內可以保存半年。
4、亞硫酸水溶液 (漂白液)：在200ml蒸餾水中，加入10ml 1N HCl 和10ml 10%偏亞硫酸氫鈉水溶液（或1.0g固體）。此液在臨用前配制。否則會因SO2的的逸出而失效。
5、5%三氯乙酸。
6、0.5%固綠酒精溶液（95%的酒精溶解）。
7、45%醋酸。
主要設備
顯微鏡、恒溫水浴鍋、溫度計、鑷子、解剖針、刀片、 剪刀、冰箱、溫箱、天平、載玻片、蓋玻片、吸水紙、鏡頭紙、青霉素小瓶、吸管、燒杯、量筒。
實驗材料
Carnoy液固定的大蒜根尖。
實驗步驟
1、材料準備：取大蒜若干頭，剝皮后置于盛有水的培養皿內使其長出新根。待根尖長25px時，剪下根尖固定在Carnoy固定液內24小時以上備用，固定時以冰箱中進行為宜。
2、水解：實驗時，從冰箱取出預先準備好的大蒜根尖，分裝到若干個青霉素瓶中，用自來水洗3次，蒸餾水水洗3次，換1mol/L HCl洗一次，傾去，換入預熱60℃的1mol/L HCl 3ml，放入恒溫水浴鍋中在60±0.5℃下水解8-15分鐘（視材料而定，水解時間可以從8分鐘延長至30分鐘）。然后吸去熱1mol/L HCl，換入冷1mol/L HCl洗1次，再用蒸餾水將根尖洗3次。
水解是本實驗成敗的關鍵之一。重要的是溫度，應保持在60±0.5℃之間。如果溫度過高或時間過長，造成水解過度，醣與醛基之間的鍵被破壞，醛基流失到水解液中；反之，不能出現潛在的醛基，都不能呈現顏色反應。
3、染色：吸凈水分，加入Schiff試劑避光染色40min~60min，用漂洗液漂洗2～3次，每次5min,然后經自來水流水沖洗，再用蒸餾水洗2次后準備壓片。
4、壓片法：取一根尖置于載玻片上，用刀片切下生長區部位（染成紫紅色），加一滴0.1%亮綠水溶液對染一分鐘，吸去亮綠液，加一滴清水或45%醋酸水溶液，加蓋玻片，用拇指輕壓使細胞分散均勻，鏡檢。
5、對照組預先用5%三氯醋酸（90℃）處理15min，然后再依次進行實驗步驟2、3、4。
注意事項
1、Feulgen反應的染色深淺與材料、水解時的溫度和時間都有關系。水解時間的長短要根據固定液和材料來進行選擇，時間太短則游離的醛基量
少而染色不深，時間太長會因醛基進一步變成其它物質，染色也不深。水解時的溫度要嚴格控制。
2、未經水解的對照切片在schiff試劑中最多不要超過1 h (40分鐘即可)，時間過長，試劑本身的酸性也會使DNA水解，從而出現假的正反應。
3、Schiff試劑的作用：Feulgen反應成功與否的一個非常關鍵的因素，就是schiff試劑的質量。有一大類試劑均稱為堿性品紅，它們實際上是由幾
種產品分別組成的。因此只能選用注明“DNA染色反應用”的堿性品紅才行。此外，Schiff試劑的配制方法也可影響DNA的染色反應。
4、漂白液的重要性：漂洗時，所用的亞硫酸水，最好在每次實驗前臨時配制，以便保持較濃的SO2。
5、操作過程中，用鑷子鑷取根尖的生長區部位，切勿夾取根冠部位。