簡單、快速、準確。
國家相關標準
標準溶液配制
精確稱取100 mg枸櫞酸西地那非標準品于100 mL容量瓶中,加入流動相50 mL使溶解,再用流動相定容至刻度,配制成1 mg/mL的儲備液。取儲備液適量,用流動相逐級稀釋,配制成濃度分別為0.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0μg/mL的標準溶液。
樣品處理
固體樣品:稱取樣品10 g,研磨均勻,然后精密稱取2 g研磨均勻的樣品,加入1%甲酸甲醇溶液10 mL,超聲提取30 min后用1%甲酸甲醇溶液補足體積,過濾,取5 mL濾液作為待凈化液。 液體樣品:按樣品體積比1%加入甲酸,過濾,精密取濾液5 mL作為待凈化液。
Strata X-C小柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化平衡后,將待凈化液分次過該小柱,再分別用3 mL水和3 mL甲醇清洗,抽至近干后,用5%氨水甲醇溶液洗脫3次,每次1 mL,收集洗脫液。整個過程流速小于1 mL/min。洗脫液用氮氣吹干,1 mL流動相溶解,0.45μm濾膜濾過,續濾液作為供試品溶液。
固相萃取條件的選擇
保健品中成分復雜,簡單的液-液萃取并不能除去大部分雜質,會嚴重干擾西地那非的液相測定。Strata-X-C是混合型陽離子交換固相萃取小柱,對堿性化合物有很強的專屬選擇性,成功用于復雜樣品中三聚氰胺等堿性化合物的純化和濃縮。
西地那非為堿性化合物,本法利用其堿性性質,采用Strata-X-C對樣品進行純化和濃縮,分別使用水和甲醇清洗,除去大部分水溶性和脂溶性雜質,再用5%氨水甲醇溶液洗脫堿性的西地那非。
本固相萃取方法凈化效果好,回收率穩定,平均為95.8%(20μg/mL,RSD=3.9%,n=6)。
色譜條件的選擇
本法試驗了不同比例的乙腈與0.1%甲酸水溶液以及乙腈與不同濃度醋酸銨水溶液作流動相的效果,發現乙腈與10 mM醋酸銨水溶液作流動相時,峰形對稱、尖銳,檢測靈敏度高。本法還采用實驗室常用的紫外檢測器檢測,適用于一般實驗室的常規檢測分析。
本法使用了50 mm長的Kinetex C18色譜柱。Kinetex C18色譜柱是一種新型核-殼技術填料色譜柱,由于大大改善了填料的傳質阻抗影響,可以在常規液相色譜儀器上實現超高壓液相的性能,從而達到快速、高效的效果,大大提高工作效率,且不受儀器條件的影響,方便在各個實驗室進行方法轉移。在流速1.8 mL/min下,西地那非在約2.5 min處出峰,沒干擾。
主要儀器
高效液相色譜儀(南京科捷);超聲波清洗器;氮吹儀;離心機。
試劑
枸櫞酸西地那非標準品;固相萃取小柱Strata X-C 60 mg/3 mL;乙腈;甲酸、氨水、醋酸銨;文中所用水均為超純水。
色譜條件
色譜柱:C18 2.6μm 50 mm x 4.6 mm;
流動相:乙腈-10 mM醋酸銨(V/V=35/65);
流速:1.8 mL/min;
柱溫:室溫;
檢測波長:290 nm;
進樣量:10μL
本法采用陽離子交換固相萃取小柱對樣品進行凈化后,進行高效液相色譜分析。固相萃取可除去樣品中的大量雜質,再使用高效的液相色譜柱使枸櫞酸西地那非能夠快速出峰(僅約2.5 min)而不會受雜質峰干擾。
該方法操作簡單,省時快速,精密度和準確度高,可用于片劑、膠囊劑、丸劑等固體保健品和口服液、酒類等液體保健品中枸櫞酸西地那非的檢測。