定量色譜分析是根據成分檢測響應信號的大小,定量測定樣品中各成分的相對含量,這是基于每種成分的量(重量或體積)與色譜檢測器產生的檢測響應值(峰高或峰面積)成比例的事實。具體到具體方法,主要有以下幾種方法:
1.標準化方法
當樣品中的所有成分都可以流出高效液相色譜儀的色譜柱并在檢測器上產生相應的信號(色譜峰)時,通常使用歸一化。
CI=MI/M,100%=FIAI/ or FIAI (100 per cent)
*優點:簡單方便,不受注射量和操作條件波動的影響
*缺點:所有組件必須達到峰值,每個組件必須有一個校正系數
2.外部標準法(也稱為標準曲線法)
制備已知濃度的標準樣品進行高效液相色譜儀的色譜分析,測量各組分的峰面積或峰高,繪制峰面積(或峰高)和濃度的標準曲線,然后在相同的操作條件下,輸入相同量(總體積)的未知樣品。ns作為分析的標準樣品,測量被分析成分的峰面積(或峰)。在標準曲線上發現了相應的濃度。
該方法主要用于工廠的日常控制分析,分析結果的準確性主要取決于注射量的重復性和操作條件的穩定性。
CI=MI/m × 100%=fiai/m × 100%
*校準:標準曲線、兩點法和單點法
*優點:簡單方便,不需要所有成分達到峰值(校正系數),常用于幾個成分的分析
*缺點:操作條件的波動影響很大,注射量影響很大。
3.內部標準法
由于吸附或化學反應等原因,高效液相色譜儀色譜柱不能讓所有組分流出,或者所有組分都可以流出,但是檢測器不能給所有組分提供相應的色譜峰,或者有些樣品太大(不能獲得完整的峰),或者太小,或者只需要對復雜樣品中的幾個組分進行定量分析,可以采用內標法。
過程:如果在總質量為m的樣品中加入質量為mS的內標物質s,則根據被測物質和內標物質的重量以及高效液相色譜儀的色譜圖上相應的峰面積比,得到某一組分ⅰ的含量
mi/ms = fiAi / fsAs
Ci = mi/m ×100%
= fiAi ms / fsAs m×100%
*優點:所有部件不需要達到峰值(校正系數),操作條件和注射量基本不受影響。
*缺點:很難找到內部標準-穩定且無反應、結構性能、相似性、保留時間插值和完全分離
*注:內標法更適合低含量成分的分析。通常,被選為內標的物質優選不存在于樣品中,其保留值在所有組分的保留值中間。添加的內部標準的內容和待測試組件的內容不應有很大差異。
4.疊加法(內部加法)
內部添加適用于更特殊的情況:當地圖上沒有合適的位置插入內部標準峰,或者由于各種條件沒有合適的內部標準時。
此時,可以先從樣品中繪制一張圖譜,然后在注射前將一定量的被測組分添加到樣品中,以查看峰面積增加了多少,并且可以根據該比值計算原始含量。