實驗材料 基因樣品
儀器、耗材 PCR
實驗步驟
1. 反應體積為50 μl。
2. 人CD137胞膜外區基因的PCR擴增體系：CD137-pCDNA3質粒4 μl，P1，P2各0.5 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。
3. hIgG1Fc片段的PCR擴增體系：含人hIgG1Fc的PGEM-T質粒4 μl，P3、P4各0.4 μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。
4. HBVDNA多聚酶基因的PCR擴增體系：
（1）第一輪：HBVDNA模板4 μl，P5、P6各0.25 μmol/L，MgCl2 1.5 mmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，Taq 0.8 U.
（2）第二輪：取5倍稀釋的第一輪PCR產物4μl為模板，P7、P8各0.25 μmol/L，MgCl2 1.5 mmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，Taq 0.8 U。
5. 分別在各滅菌PCR管加入上述各反應成分，100℃煮沸5 min，立即冰浴5 min，加入TaqDNA聚合酶，混勻，離心，PCR程序如下：
6. 取 10 μl PCR 擴增產物，在2%或3%瓊脂糖凝膠上電泳，紫外燈下觀察擴增產物。
注意事項
1. 由于目標是在較早的循環中避免低Tm值配對，在TD—PCR中最好應用熱啟動技術。設計時，退火溫度的范圍應跨越15℃左右，從高于估計Tm值至少幾度到低于它10℃