發病一周內取血液，第二周以后取尿，有腦膜炎型癥狀者取腦脊液進行檢查。
1．顯微鏡檢查直接鏡檢：取抗凝血1000轉/分、離心10分鐘，除去血細胞；血漿再以10000轉/分，離心40分鐘，棄上清取沉淀物暗視野顯微鏡檢查。染色鏡檢：涂片后用Fontana鍍銀染色鏡檢。另外，還可用免疫熒光法或免疫酶染色法檢查。
2．分離培養與鑒定將血液數滴接種于柯氏（Korthoff）培養基（4.5～5ml），每份標本接種2～3管，于30℃培養5天，每隔3～5天，用暗視野顯微鏡檢查一次。如有鉤體生長，再傳代培養，用生長良好的菌液作鑒定，陰性者至少培養30～40天，仍未查到才能報告。尿液標本一般需濃縮（離心）后培養，培養時需加抑菌劑如5-氟尿嘧啶等；也可將標本接種于豚鼠腹腔進行分離。