通過甘油分級梯度離心純化λ噬菌體顆粒實驗

λ 噬菌體顆粒懸浮液

EDTA 甘油 SM 胰 DNase Ⅰ

Beckman SW41 或 SW28 轉子或相當型號 離心管

一、材料

1. 緩沖液和溶液

EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0 )

甘油（5% 和 40%，V/V ) 于 SM 中

SM

2. 酶和緩沖液

胰 DNase Ⅰ (1 mg/ml)

胰 RNase 于 TE 中（1 mg/ml，pH 7.6)

3. 離心機和轉子

Beckman SW41 或 SW28 轉子或相當型號，配有清亮的離心管（如 Beckman 超亮離心管）

4. 載體和菌株

λ 噬菌體顆粒懸浮液

二、方法

1. 在 Beckman SW41 聚碳酸酯離心管（或相應離心管）中制備甘油分級梯度（每管加 5 ml 噬菌體懸浮液）：

(1) 取 3 ml 含 40% 甘油的 SM，加入至離心管管底。

(2) 在 40% 甘油溶液上小心加入 4 ml 含 5% 甘油的 SM。

(3) 在 5% 甘油的頂層小心加入噬菌體懸浮液，最后用 SM 補滿。

2. 分級梯度于 4℃ 151000 g ( 35000 r/min 于 Beckman SW41 或 SW28 轉子中）離心 60 min。

3. 去上清，每升培養物原液加 1 ml SM 重懸噬菌體沉淀。

4. 加胰 DNaseⅠ和 RNase 至終濃度分別為 5 μg/ml 和 1 μg/ml，37℃ 溫育 30 min。

5. 加 0.5 mol/L 的 EDTA 儲液（pH 8.0) 至終濃度為 20 mmol/L。