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  • 發布時間:2022-05-25 13:11 原文鏈接: 超聲法破碎細胞提蛋白質的具體步驟

    這樣說吧,如果我們用原核表達載體表達一段目標基因,我們先把這個基因通過酶切連接的原核表達載體上,再轉化到大腸桿菌中進行誘導表達,常用的誘導物是IPTG,37度誘導表達4小時,這樣表達出的目標蛋白一般以包涵體的形式存在細菌內,然后用超聲破碎細菌,首先將吸取5ml的細菌放入試管中,然后放在超聲儀中,開80hz的頻率進行破碎細菌,待到細菌全部破碎,溶液變清亮為止,然后你可以洗滌沉淀,進行包涵體蛋白的收集,后面你可以做一個SDS-PAGE蛋白質電泳和Western-blot,這樣就可以確定你的要蛋白是不是你的蛋白。
    最后,你可以大量的搖菌提取蛋白質了,祝你好運,我也是做這方面的研究,已經做到蛋白質電泳這一步了,祝你好運。

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