論細胞計數和活率檢測在磁珠分選的重要性

　　磁珠分選方法是常用的分選方法之一，用于免疫學、神經學、干細胞、腫瘤細胞等多個研究領域，把一種細胞從多細胞樣品中快速、便捷地分離出來。評估磁珠分選的主要指標包括：

　　◇純度：純度越高，分選效果越好；

　　◇得率：得率越高，成本控制和分選效果越好；

　　◇細胞活率：分選細胞活率越高，分選效果越好。

　　有很多因素影響到純度和得率，如抗體特異性、磁珠大小、分選前細胞的數量和活率等。其中磁珠大小和抗體特異性主要取決于磁珠分選產品的廠家，選擇優質品牌產品是實驗成功和可靠的關鍵，這是眾所周知的道理，只需要研究者判斷品牌的優劣。但是分選前細胞數量的計數和活率的檢測，這些看似簡單又容易被忽略，卻也是影響分選得率和純度，以及分選后細胞活率的關鍵因素。

　　在這里我們以Human CD4+ Cell分選為例來闡述細胞計數和活率檢測的重要性。

　　第一步 PBMC的密度梯度離心分離

　　為了磁珠分選步驟能獲得更多的CD4+細胞，首先我們對全血進行初步分離即密度梯度離心，獲得相對純度較高的PBMC細胞。

　　密度梯度分離后，我們需要進行PBMC細胞的精確計數，因為抗體磁珠的加入量需要根據細胞數量及體積進行調整；以及進行PBMC細胞存活率的檢測，確定分離的PBMC細胞狀態是否還適合進行下一步的分選（通常PBMC存活率在90%以上適合進行下一步分選）。

　　AO/PI雙熒光計數PBMC和存活率

　　第二步 分選前磁珠分選buffer洗PBMC細胞

　　經過多次的清洗和離心，會丟失不少細胞，因此加入磁珠抗體前的最后一步清洗，一定要進行細胞計數和檢測活率。

　　第三步 分選后細胞的計數和活率檢測

　　磁珠分選后所得細胞數量和細胞狀態如何，是后續實驗是否能順利進行的前提。

　　從上而看這個磁珠分選的過程都需要檢測細胞的數量和細胞的活存率，以監測整個分選過程，以及保證細胞分選的得率和純度；PBMC中不同程度的混雜著紅細胞和血小板，AOPI雙熒光核染料可以排除血小板、紅細胞等無核細胞的干擾，精確計數PBMC和活率。