（一）性別
大多數酶在男女之間無大差異，但少數酶如CK、GGT在男女之間有明顯差異，因此不能以一個參考值作為判斷標準。建議以130U/L為男性正常參考上限，100U/L為女性參考值上限。
（二）年齡
不少酶在兒童時期與成人有所不同，例如新生兒的CK、LD.蘋果酸脫氫酶（MD）、ACP和谷氨酸脫氫酶（GLD）等常為成人2-3倍，尤其前兩項CK、LD是臨床常用的酶。
CK出生24小時內可為成年人的3倍，到嬰兒時降為兩倍，到青春期降到成年人值。LD在出生時也為成人兩倍，逐漸下降到14歲和成年人值一致。同時LD1值兒童期也比成年人高，正常兒童也可出現LD1>LD2，如不注意此點，簡單以正常成年人參考值為診斷標準，易導致兒童心肌炎的誤診。
（三）進食
大多數血清酶不受飲食影響，故測酶活性不一定空腹采血。但應注意酗酒者常引起GGT明顯升高，日本學者認為可根據血中GGT升高判斷酗酒程度，如未累及肝臟，戒酒后一周GGT可降至正常。此外如禁食數天可導致血清AMY下降。
（四）運動
劇烈運動可引起血清中多種酶升高，升高程度和運動量及持續時間有關，也與運動者是否經常鍛煉相關。升高的酶多為肌肉中含量豐富的CK、LD.AST醫學教育網搜|集整理、醛縮酶（ALD）和ALT等，這些酶變化機制和意義是運動醫學的一個重要研究項目。
（五）妊娠與分娩
妊娠期出現一系列生理變化，也可引起一些酶升高，如不注意有可能引起誤診。例如由于胎盤產生耐熱的ALP可引起血中ALP值超過正常，LAP也會明顯升高，但都無臨床診斷價值。銅氧化酶在妊娠期升高，若胎兒死亡，此酶很快降至正常。