血清淀粉酶（AMS）測定實驗

發布時間：2020-08-10 17:33 原文鏈接：血清淀粉酶（AMS）測定實驗

實驗方法原理	血清或血漿中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1.4葡萄糖苷健水解，產生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1.6糖苷鍵支鏈的糊精，在底物充分（已知濃度）的條件下，反應后加入碘液未經碘水解的淀粉結合成藍色化合物，其顏色的深淺與未經酶促反應的空白等比較，從而推算出酶的活力單位。
實驗步驟	一、實驗試劑： 1. 0.4g/L緩沖淀粉液：于約500ml蒸餾水中溶解9克氯化鈉，22.6g無水磷酸鈉（或Na2HPO4·12H2O 56.94克）和 12.5g無水磷酸二氫鉀，加熱至沸，另取一小燒杯，精確稱取0.4g可溶性淀粉，加人約10ml蒸餾水，使溶液成糊狀后，加入上述沸騰之溶液中，水洗燒杯一并倒入，冷至室溫后，加人37％甲醛溶液5ml，用蒸餾水稀釋至1升，該溶液PH為7.0±0.1，放置冰箱保存。 2. 0.1mol/L碘貯存液：與約400ml蒸餾水中溶解1.7835g碘酸鉀及22.5g碘化鉀，緩慢加入4.5ml濃鹽酸，邊加邊攪拌，用蒸餾水稀釋至500ml充分混勻，貯棕色瓶塞緊置冰箱保存。 3. 0.01mol/L碘應用液：取碘貯存液，用蒸餾水稀釋10倍，貯存棕色瓶置冰箱可用一個月。二、實驗操作：血清先用生理鹽水作10倍稀釋，按操作進行混勻，用660nm波長，1.0nm光徑比色杯，蒸餾水調零，讀取各管光密度單位定義：100ml血清中的淀粉酶，在37℃15分鐘水解5mg淀粉為一個單位。三、計算：淀粉酶單位=(AB-AU）×／AB×800 參考值：80--180U 尿液100--1200 U 注意事項1. 草酸鹽. 枸櫞酸鹽，EDTA. Na2及氰化鈉對AMS活性抑制，肝素無抑制。2. 酶活性在40OU以下時，與底物的水解成線性，如測定管吸光度小于空白管吸光度一半時應將血清加大稀釋倍數，或減少稀釋血清加入量，測定結果，乘以稀釋倍數。3. 本法使用于其他體液淀粉酶測定，尿液先做20倍稀釋后測定。4. 唾液含高濃度淀粉紹須防止帶入。5. 淀粉溶液若出現混濁或絮狀物，表示淀粉溶液受污染或變質

實驗方法原理

血清或血漿中α-淀粉酶催化淀粉分子中α-1.4葡萄糖苷健水解，產生葡萄糖、麥芽糖及含有α-1.6糖苷鍵支鏈的糊精，在底物充分（已知濃度）的條件下，反應后加入碘液未經碘水解的淀粉結合成藍色化合物，其顏色的深淺與未經酶促反應的空白等比較，從而推算出酶的活力單位。

實驗步驟

一、實驗試劑：

1. 0.4g/L緩沖淀粉液：于約500ml蒸餾水中溶解9克氯化鈉，22.6g無水磷酸鈉（或Na2HPO4·12H2O 56.94克）和 12.5g無水磷酸二氫鉀，加熱至沸，另取一小燒杯，精確稱取0.4g可溶性淀粉，加人約10ml蒸餾水，使溶液成糊狀后，加入上述沸騰之溶液中，水洗燒杯一并倒入，冷至室溫后，加人37％甲醛溶液5ml，用蒸餾水稀釋至1升，該溶液PH為7.0±0.1，放置冰箱保存。

2. 0.1mol/L碘貯存液：與約400ml蒸餾水中溶解1.7835g碘酸鉀及22.5g碘化鉀，緩慢加入4.5ml濃鹽酸，邊加邊攪拌，用蒸餾水稀釋至500ml充分混勻，貯棕色瓶塞緊置冰箱保存。

3. 0.01mol/L碘應用液：取碘貯存液，用蒸餾水稀釋10倍，貯存棕色瓶置冰箱可用一個月。

二、實驗操作：血清先用生理鹽水作10倍稀釋，按操作進行

混勻，用660nm波長，1.0nm光徑比色杯，蒸餾水調零，讀取各管光密度

單位定義：100ml血清中的淀粉酶，在37℃15分鐘水解5mg淀粉為一個單位。

三、計算：淀粉酶單位=(AB-AU）×／AB×800

參考值：80--180U 尿液100--1200 U

注意事項1. 草酸鹽. 枸櫞酸鹽，EDTA. Na2及氰化鈉對AMS活性抑制，肝素無抑制。2. 酶活性在40OU以下時，與底物的水解成線性，如測定管吸光度小于空白管吸光度一半時應將血清加大稀釋倍數，或減少稀釋血清加入量，測定結果，乘以稀釋倍數。3. 本法使用于其他體液淀粉酶測定，尿液先做20倍稀釋后測定。4. 唾液含高濃度淀粉紹須防止帶入。5. 淀粉溶液若出現混濁或絮狀物，表示淀粉溶液受污染或變質

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