1.采血時機
在患者發熱期間越早越好，最好在抗菌治療前，以正在發冷發熱前半個小時為宜。
2.采血次數及間隔
急性發熱性疾病需馬上做抗菌治療或急性骨髓炎、化膿性關節炎等要緊急手術的患者，應立即從兩臂分別取2份標本。對感染性心內膜炎患者，在24h內取血3次，每次間隔不少于30min；必要時次日再做血培養兩次。對發熱原因不明者兩次抽血間隔60min；必要時于24-48h后再抽血2次。1次血培養不足以說明問題，且會遺漏陽性結果。
3.采血部位
多次采血應在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌群污染的可能。避免從血管插管內取血，因插管常被污染。
4.采血量
成人菌血癥或敗血癥的血液中含菌量較少，平均1-3ml血液中僅有1個細菌。所以采血量一定要足夠。成人一般為10ml，新生兒與嬰幼兒為1-2ml。有人引述多篇文章指出：對成人每增加1ml血量平均能提高陽性率3.2%。培養基選擇：培養基的質量對血液細菌培養陽性率的高低有非常重要的作用。
5.培養條件
盡管病原菌仍以需氧菌和兼性厭氧菌為主，但亦有少部分為真菌、厭氧菌或L型菌感染。所以必要時選取相應培養基在不同環境下培養。
6.盲傳的必要
肉眼和儀器都不能確保在瓶外觀察到所有的陽性菌生長，在培養終結時盲目傳代1次防漏檢。
采血
7.無菌操作
在血液培養的全過程皆應十分注意無菌操作。用頭皮針為新生兒和嬰幼兒取血時，應換針頭再將血注入培養瓶中。