基本方案
| 實驗方法原理 |
熒光素 4-單氧酶（ATP-水解）提取于螢火蟲，Photinus Pyralis。 熒光素＋ATP＋O2→氧和蟲熒光素＋PPi＋H2O＋光 光密度 I 是和 Michaelis-Menten 等式相關的
式中，H 是 Planck 常量；v 是發射光的頻率。當 ATP 濃度非常低（［ATP］＜＜Km）時，Michaelis-Menten 等式就可以簡化成： I＝常量 ×［ATP］ 常量＝Ｖ/Km。光密度與 [ATP] 成正比。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 熒光素酶 |
| 試劑、試劑盒 | Tris-乙酸 ATP MgSO4 熒光素 |
| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」
開始加入 0.01 ml ATP 10 s 后（25℃）讀光密度值（562 nm 處的放射最大值）。利用在 0.05～0.5 umol/L 之間的 ATP 制作標準曲線。 一個酶單位被定義為，在 25℃ 甘氨酸-Tris pH 7.6 溶液中，含 5 pmol ATP 及 7.5 nmol熒光素的 50 ul 實驗混合物所測量到的光輸出。一個光輸出單位產生一個生物計最高峰相當于在 PPO/POPOP 雞尾酒中 14C 的 0.02 uCi（1991 年以前，1 個單位是指 pH 7.7、25℃ 時，存在 0.6 mmol/L ATP 和 0.1 mmol/L D-熒光素的條件下，每分鐘能產生 1 nmol 焦磷酸的熒光素的量）。
展開 |
| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑 0.1 mol/L Tris-乙酸，pH 7.75 10 mol/L ATP（二鈉鹽，三水合物，Mr＝605.2；準備 10 mmol/L 60.5 mg 溶于 10 ml 溶液并且稀釋 10 ul 于 10 ml 水中） 0.1 mol/L MgSO4（MgSO4·7H2O，Mr＝246.5；246 mg 溶于 10 ml 水中） 1 mol/L 熒光素（4，5-二氫-［6-羥基-2-苯噻唑］-4-噻唑酸，Mr＝280.3；鈉鹽，Mr＝302.3；3 mg 溶于10 ml 0.1 mol/L Tris-乙酸 pH 7.75， 儲存于 -20℃）。 熒光素酶（提取于螢火蟲，1 ug/ml溶于 0.1 mol/L Tris-乙酸，pH 7.75）
展開 |
在生物學和醫學領域，我們經常會需要檢測生物學分子，比如在癌癥診斷中，醫生往往需要快速可靠的方法來知曉腫瘤細胞是否存在于患者機體中；盡管存在很多檢測手段，但通常這些技術都非常耗時、昂貴。近日，刊登在國際......
據俄羅斯科學院網站報道，克拉斯諾亞爾斯克的生物物理學家利用一種叫做Metridialonga的小型橈足類海蝦合成了世界上最小的發光生物分子--熒光素酶分子。其研究成果全文發表在《生物化學和生物物理研究......
熒光素的產生實質上是受熒光蛋白基因的控制的，在這種基因的轉錄和翻下指導合成的熒光蛋白實質上就是熒光素酶了熒光素是自然界中能夠產生生物螢光的酶的統稱，其中最有代表性的是一種學名為Photinuspyra......
