腦膜炎奈瑟菌微生物學檢查法及防治原則!
腦膜炎奈瑟菌(學名Neisseria meningitidis),又名腦膜炎雙球菌或腦脊髓膜炎雙球菌,簡稱為腦膜炎球菌,是一種革蘭氏陰性菌,因其所導致的腦膜炎而聞名,亦會造成腦膜炎球菌血癥(一種致命性的敗血癥)。它只感染人類,并無寄生的動物,是唯一令細菌性感染腦膜炎成為流行病的病菌。約10%成人的鼻咽中有它的蹤跡。
一、微生物學檢查法
1、標本
取患者腦脊液或刺破皮膚出血瘀斑取滲出物作涂片或培養。血液標本作培養。帶菌者檢測可取鼻咽拭子。
2、直接涂片鏡檢
腦脊液離心沉淀后,取沉淀物涂片,革蘭染色后鏡檢。或消毒患者皮膚出血瘀斑處皮膚,用無菌針頭挑破瘀斑取滲出物制成涂片,革蘭染色后鏡檢。如鏡下見到中性粒細胞內、外有革蘭染色陰性雙球菌時,即可作出初步診斷。
3、分離培養與鑒定
血液與腦脊液標本在血清肉湯培養基中增菌后,接種到巧克力色血瓊脂平板上,置于含5%~10%CO2的環境中孵育。挑取可疑菌落涂片鏡檢,并作生化反應(表13-1)及型特異性多價血清的凝集試驗鑒定。
4、生化鑒定
主要通過氧化酶、糖類發酵以及培養生長特點進行。
①細菌形態呈腎形;
②氧化酶試驗陽性;
③觸酶試驗陽性;
④分解葡萄糖、麥芽糖產酸不產氣;
⑤莢膜多糖抗原直接凝集試驗。
5、血清凝集法
根據莢膜多糖可將腦膜炎奈瑟氏菌分為A、B、C、D、X、Y、Z、29E、W135、L、H、I、K等13個血清群,其中A、B、C群最為多見,約占90%。
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6、核酸擴增法
流行性腦膜炎的臨床診斷通常以出現發熱、嘔吐、頭痛等臨床癥狀為依據。進一步的確診則需在病人腦脊液或急性衄液中分離到腦膜炎雙球菌。但分離培養方法的檢出陽性率較低.并且至少需要2~3 d才能確診感染.這對疾病的及時治療極為不利。此外,受抗生素使用及其他非特異性因素的影響.分離培養法的靈敏度不高.極大地降低了診斷結果的可靠性。因此,尋找一種快速、靈敏并且適用于I臨床診斷的檢測方法已顯得非常鶯要。近年來,因為具有特異性好、靈敏度高、檢測周期短等優點,在PCR的基礎上建立的基因診斷技術已廣泛應用于多種病原微生物的臨床檢測。四川大學華西公共衛生學院聯合四川省疾病預防控制中心以PCR技術為基礎,結合我國流腦的流行現狀,建立了Nm ABC群的快速診斷方法。
核酸擴增技術,即聚合酶鏈式反應(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是設計、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對應于待測病原微生物某一段特異性序列的兩端,然后在體外模擬DNA體內復制的過程反復擴增,使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。
7、快速診斷法
依據是腦膜炎患者腦脊液及血清中存在腦膜炎奈瑟菌可溶性抗原。因此可采用已知的抗體檢測有無相應的抗原。
⑴對流免疫電泳:此法較常規培養法敏感,特異性高。一般1小時內即可得到結果。
⑵SPA協同凝集試驗:將待檢的患者腦脊液或血清與已知腦膜炎奈瑟菌IgG類抗體標記的產生SPA的金黃色葡萄球菌混合。若標本中存在腦膜炎奈瑟菌的可溶性抗原,則使抗體標記的金黃色葡萄球菌聚集在一起,形成肉眼可見的凝集現象。
二、防治原則
預防腦膜炎奈瑟菌感染的關鍵是要盡快消除傳染源、切斷傳播途徑及提高人群免疫力。
我國1980年正式使用A群多糖菌苗,臨床觀察表明對學齡兒童和成人保護率可達90%。但此種疫苗對2歲以下嬰幼兒免疫原性差,其一是因為腦膜炎莢膜多糖抗原屬于T細胞非依賴抗原,免疫效果與接種者年齡有明顯的依賴關系;其二,多糖菌苗誘導機體產生的IgG抗體主要為IgG2亞類,出現較遲,一般到8~12歲才能上升至成人水平。因此,嬰幼兒接種多糖菌苗后往往以產生短暫的IgM抗體為主。國外采用A群和C群多糖與白喉毒素蛋白偶聯的偶聯菌苗接種8~10周齡的嬰兒,證明這種偶聯菌苗具有良好的免疫原性及安全性。
流腦的治療首選藥物為青霉素G,劑量要大。對青霉素過敏者,可用氯霉素或紅霉素。
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