血清TT4測定方法有放射免疫法(RIA)、酶標免疫法(EIA)和競爭性蛋白結合法(CPBA)。
TT4的放射免疫測定已制備成檢測藥盒，使用方便，操作簡單，靈敏可靠，對人無害，臨床最為常用。
酶標免疫法的原理同放射免疫法，只是標記物不是放射性125I，而是酶，本法測定簡便，快速，無放射性損害，但其測定結果不及RIA靈敏。
競爭性蛋白結合法原理亦同放射免疫法。因天然TBG和T4結合較牢固，標記125碘T4和被測血清T4能與天然TBG競爭結合，把待測血清和125碘-T4-TBG試劑混合，部分125碘-T4被置換出來，測定125碘-T4-TBG結合狀態的放射量，即可推算出被測血清T4的含量。
血清TT4的正常值與測定方法有關，亦和采用的阻斷劑、分離方法及實驗室條件有關，國內各大醫院各有不同。此外血清TT4值隨著年齡增長，而有相應的變化。