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  • 實驗方法原理將抗μ鏈球蛋白(豚鼠抗兔IgM 抗體)非特異地吸附在固相上,加入待檢乙腦病人血清,血清中的IgM 能和抗μ鏈球蛋白結合。當再加入定量特異性日本乙腦病(JBEV)抗原和酶標記的相應抗體(兔抗IBEV IgG)時,病人血清抗體再與IBEV 抗原和酶標抗IBEV IgG 結合作用于酶底物,酶底物顯色反應,借此可測出血中IgM 抗體的含量。

    實驗步驟

    1.  用包被液稀釋豚鼠抗兔IgM 抗體至l0 (g/ml,加至40 孔板,每孔0.2 m1。置濕盒37 ℃1 小時,再置4 ℃過夜。用洗滌液洗三次。

    2.  用稀釋液稀釋待檢血清,然后加至40 孔板,每孔0.2 ml。置濕盒,37 ℃1 小時,用洗滌液洗三次。

    3.  用稀釋液將乙腦病毒抗原稀釋至50 個血凝單位,對照抗原用同法稀釋。分別加入40 孔板中,每孔0.3 ml。置濕盒4 ℃過夜,用洗滌液洗三次。

    4.  用稀釋液稀釋辣根過氧化物酶標記的兔標JBEV IgG,加至40 孔板,每孔0.2 ml,37 ℃l 小時,用洗滌液洗三次。加鄰苯二胺(OPD)底物液,每孔0.2 ml。避光置室溫30 分鐘。加2M H2SO4 0.05 m1,終止反應。

    用分光光度計測出各孔OD 值,波長選擇495 nm。

    4.  結果

    P/N (3.0 為血清JBEV IgM 抗體陽性。

    標本平均OD 值- 空白對照OD

    陰性對照OD 值一空白對照OD


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