病毒分離和鑒定
病毒分離培養是當今臨床上明確診斷皰疹病毒感染的可靠依據。可采集皮膚、 生殖器等病變部位的水皰液、腦脊液、角膜刮取物、唾液等標本，接種人二倍體成纖維細胞株WI38及其它傳代細胞株如Vero、BHK等，經24～48小時后，細胞則出現腫脹、變圓、細胞融合等病變。然后用HSV-1和HSV-2的單克隆抗體作免疫熒光染色鑒定或應用DNA限制性內切酶圖譜分析來定型。
抗體檢測
常用于抗體檢測的方法有補體結合試驗、中和試驗、免疫熒光及酶聯免疫吸附試驗等，臨床多用于急性感染診斷和器官移植患者的檢測，以及流行病學調查。如用于急性感染診斷，應采取急性期和恢復期雙份血清，同時檢測血清中的IgG和IgM。
DNA檢測
取病變組織或細胞，提取病毒DNA，與標記的HSV DNA探針進行雜交或應用PCR檢測HSV-1或HSV-2的gB糖蛋白基因來判斷是否是HSV的感染。這種方法已用于疑為HSV腦炎患者的診斷。