由NAD＋還原反應測定的PDHC總活性實驗

PDHC

磷酸鉀 NAD＋ 二磷酸硫胺 MgCl2 丙酮酸 二硫代蘇糖醇 輔酶 A

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.98 ml 實驗混合物

0.02 ml 酶樣品

37℃ 時，在 340 nm 處吸收值發生變化。NADPH 的吸收系數 ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

試劑：

0.1 mol/L 磷酸鉀，pH 7.6

0.1 mol/L NAD^＋（Mr＝663.4，游離酸；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 二磷酸硫胺（ThDP，脫竣輔酶，Mr＝460.8；46.1 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L MgCl₂（MgCl₂·6H₂O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml 水）

0.1 mol/L 丙酮酸（丙酮酸鈉，Mr＝110.0；110 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L 二硫代蘇糖醇（DTE，Mr＝154.2，或二硫代蘇糖醇、DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L 輔酶 A（游離酸，Mr＝767.5，CoA·Li₃，Mr＝785.4；23 mg 溶于 3 ml 水中）