王曉英：快速檢測鑒定系統在食源性致病菌檢測中的應用

　　2014年5月7日上午，第三屆中國食品與農產品質量安全檢測技術國際論壇暨展覽會在北京國際會議中心盛大召開。來自中國動物疫病預防控制中心的王曉英研究員給我們帶來了題為《快速檢測鑒定系統在食源性致病菌檢測中的應用》的報告。

中國動物疫病預防控制中心 王曉英研究員

　　王曉英研究員首先講到食源性病原菌檢測傳統技術主要是直接涂片檢查。將拿到的目的菌要進行分離培養，還要通過生理生化試驗，血清學試驗或藥物敏感性試驗對病菌進行分離鑒定。對于直接涂片鏡檢技術通常有革蘭氏染色、吉姆薩染色、莢膜染色、鞭毛染色和抗酸染色，其中最常用的是革蘭氏染色方法。在細菌分離培養方面，所有食源性致病菌都需要進行前增菌和菌落分離，細菌的菌落特征也因種而異。在食品微生物檢驗中，常用血清學反應來鑒定分離到的細菌，以最終確認檢測結果。

　　在抗血清凝集技術中，多價血清用于進行細菌鑒定和分離；單克隆抗體的制備，明顯提高了細菌凝集實驗的特異性，已廣泛用于細菌的分型和鑒定，如沙門氏菌、霍亂弧菌等。而酶聯免疫吸附技術（ELISA）的應用大大提高了檢測的敏感性和特異性，現在已經廣泛地應用在病原微生物的檢測。

　　接著王研究員介紹了聚合酶鏈反應（PCR）技術。聚合酶鏈式反應，簡稱PCR，是一種分子生物學技術，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。PCR反應的五要素為引物、Taq酶、dNTPs、DNA模板和緩沖液。標準的PCR過程分為DNA變性、退火和延伸。此外還有實時熒光定量PCR（RT-PCR）技術和探針雜交——核糖體分型技術，實時PCR技術實現了PCR反應從定性到定量的飛躍，探針雜交——核糖體分型技術可以區分相近的基因型。

　　最后王研究員給我們報告了一些快速檢測鑒定系統。如基于生化反應為基礎的全自動微生物鑒定/藥敏分析系統（VITEK 32/60/120）和API細菌鑒定系統；基于酶-底物反應的ATP生物發光檢測技術等等。王研究員總結道隨著現代科技的發展，傳統的微生物檢測技術將逐漸被各種新型簡便的微生物快速診斷技術所取代；近年來興起的基因探針技術及全自動微生物檢測系統，將會從根本上改變微生物的檢測方法，具有非常廣闊的應用前景。