使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中傳染性胃腸炎病毒抗體 (TGEV Ab)含量。
豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)酶聯免疫分析實驗原理:
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)水平。用純化的豬傳染性胃腸炎病毒抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab),再與 HRP 標記的傳染性胃腸炎抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的傳染性胃腸炎病毒抗體 (TGEVAb)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)濃度。
試劑盒組成:
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2 酶標試劑
標準品(480 U/L)標準品稀釋液
3 酶標包被板
4 樣品稀釋液
5 顯色劑 A液
6 顯色劑 B液
10 說明書
11 封板膜
12 密封袋
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)酶聯免疫分析操作步驟:
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
240 U/L
120 U/L
60 U/L
30 U/L
15 U/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 5號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液
150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。