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  • 發布時間:2019-12-05 11:06 原文鏈接: 豬傳染性胃腸炎病毒抗體酶聯免疫分析試劑盒使用說明

    使用目的:

    本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中傳染性胃腸炎病毒抗體  (TGEV  Ab)含量。


    豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)酶聯免疫分析實驗原理:

    本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)水平。用純化的豬傳染性胃腸炎病毒抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV  Ab),再與 HRP 標記的傳染性胃腸炎抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的傳染性胃腸炎病毒抗體  (TGEVAb)呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)濃度。


    試劑盒組成:

    30倍濃縮洗滌液

    20ml×1瓶

    6ml×1瓶

    12孔×8條

    6ml×1瓶

    6ml×1瓶

    6ml×1/瓶

    終止液

    6ml×1瓶

    0.5ml×1瓶

    1.5ml×1瓶

    2   酶標試劑

    標準品(480 U/L)標準品稀釋液

    3   酶標包被板

    4   樣品稀釋液

    5   顯色劑 A液

    6   顯色劑 B液

    10   說明書

    11   封板膜

    12   密封袋


    標本要求:

    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


    豬傳染性胃腸炎病毒抗體(TGEV Ab)酶聯免疫分析操作步驟:

    1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    240 U/L

    120 U/L

    60 U/L

    30 U/L

    15 U/L

    5號標準品

    4號標準品

    3號標準品

    2號標準品

    1號標準品

    150μl的原倍標準品加入  150μl標準品稀釋液

    150μl的  5號標準品加入  150μl標準品稀釋液

    150μl的  4號標準品加入  150μl標準品稀釋液

    150μl的  3號標準品加入  150μl標準品稀釋液

    150μl的  2號標準品加入  150μl標準品稀釋液加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。

    配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用

    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此重復 5次,拍干。

    加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

    溫育:操作同 3。

    洗滌:操作同 5。

    顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

    10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

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