一、溶血反應
免疫血清與其相應的抗原細胞(血球、細菌及其組織細胞)相遇,并在補體的參與下可出現溶細胞反應。依抗原、抗體的種類不同可有溶血反應、溶菌反應等。
溶菌反應只在某些細菌中出現(如霍亂弧菌)。應用溶血反應是補體結合反應中不可少的因素。溶血反應是由于抗原(紅血球)和抗體(溶血素)進行特異性的結合,并吸著了補體,而使紅血球在補體的作用下被溶解,于是產生了溶血現象。
1、材料
(1)抗原:2%綿羊紅血球;
(2)抗體:溶血素;
(3)補體:取健康豚鼠血清作為補體;
(4)小試管、生理鹽水、水浴箱。
2、方法
(1)取小試管3只,按下表加入各物(容量單位為毫升);
(2)將上述3試管放在37℃水浴箱內15—30分鐘觀察有無凝血現象。
| 試管 | 2%紅血球 | 溶血素(2單位) | 補體(2單位) | 生理鹽水 | 結果 |
| 1 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | |
| 2 | 0.4 | 0.5 | —— | 1.0 | |
| 3 | 0.5 | —— | 0.5 | 1.0 |
二、補體結合反應
當抗原與其對應的抗體結合時,所生成的抗原抗體復合物能從溶液中將補體吸著此即謂補體結合。參與補體結合反應的抗原是透明的溶液,故補體結合現象不能被肉眼看出來,因此必須借助溶血系統(溶血素及相對應的羊血球)作為指示劑,來判定媒質中有無游離的補體,近而推定媒質中未知抗原(或抗體)和已知抗體(或抗原)是否進行了特異性的結合。本反應具有很高的敏感性及特異性,因之常應用于傳染病的診斷,特別診斷病毒疾病和梅毒。
由于參與本反應的各種成分間有著一定量的關系,因此在作本試驗之前,必須通過一系列的預備實驗來確定各成分的使用量,故本反應的實驗方法較為復雜。
本次實驗以傷寒桿菌免疫血清與其相對應的抗原補體結合試驗為例。
1、材料:
(1)抗原:傷寒的抽出液;
(2)抗體:傷寒桿菌的免疫血清;
(3)補體:豚鼠血清;
(4)溶血素:抗綿羊血細胞的兔血清;
(5)2%綿羊紅血球;
(6)小試管、試管架、水浴鍋。
3、方法:
預備試驗(示教說明) 預備試驗包括溶血素效價的滴定,補體效價的滴定,抗原效價的滴定及被檢血清的處理。
(1)溶血素效價的滴定 按照下表加入各物
| 管號 |
溶血素(ml) |
溶血素稀釋倍數 | 1:20補體(ml) | 生理鹽水(ml) | 20%羊血球(ml) | 假定結果 | |
| 1 | 0.5 | 1: 300 | 0.3 | 1.7 | 0.5 |
搖 勻 后 置 37 ℃ 水 浴 一 小 時 |
全溶解 |
| 2 | 0.5 | 1: 500 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 3 | 0.5 | 1: 800 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 4 | 0.5 | 1:1000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 5 | 0.5 | 1: 1200 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 6 | 0.5 | 1:1600 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 7 | 0.5 | 1: 2000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 8 | 0.5 | 1: 2400 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 9 | 0.5 | 1: 3200 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | 全溶解 | |
| 10 | 0.5 | 1: 4000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | ||
| 11 | 0.5 | 1: 4800 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | ||
| 12 | 0.5 | 1:6000 | 0.3 | 1.7 | 0.5 | ||
| 對照 | 1 | 0.3 | 2.2 | 0.5 |