實驗簡介
自然水體中病毒、細菌的含量通常可作為水質的評判指標。近年來，借助流式細胞儀對自然水樣進行病毒、細菌的鑒別與計數已經成為很多科研工作者研究的熱點。
本實驗用核酸染料 SYBR green I 對自然水樣進行染色，借助 CytoFLEX 流式細胞儀檢測，區分水體中所含的病毒與細菌，與傳統的顯微鏡計數及平板菌落計數法等相比，具有速度快，操作簡便，結果準確的優點。
材料與方法
? 試劑
? 樣品制備
| Sample Type | 自然水體 |
| Species | |
| Age of specimen | 新鮮樣本 |
| Prep Method | 1. 配置 Tris-EDTA buffer（TE，pH=7.5）； 2. 以 SYBR green I 染色的 TE 溶液 為對照設定閾值； 3. 以 SYBR green I 染色的噬藻體界定病毒的大體位置，以 SYBR green I 染色的大腸桿菌界定細菌的大體位置； 4. 檢測 SYBR green I 染色的湖水樣本中病毒與細菌的含量。 |
? 儀器配置
| Instrument Configuration | VSSC (Yes/No) | Plate or Tube Format |
| B5-R3-V5 | Yes | Tube |
數據分析
1. 建立 FSC/VSSC-Log 雙參數散點圖，SYBR /VSSC-Log 散點圖用于區分病毒與細菌；
2. 將閾值設定在 SYBR 通道，以 SYBR green I 染色的 TE-buffer 作為對照，界定閾值將雜信號去掉；
3. 以 SYBR green I 染色的噬藻體界定病毒的大體位置，以 SYBR green I 染色的大腸桿菌界定細菌的大體位置；
4. 檢測自然水樣中病毒和細菌的含量。
實驗結果
CytoFLEX 是第一臺借助 VSSC 可檢測 100nm 微顆粒的流式細胞儀，在本次實驗中 CytoFLEX 流式細胞儀可通過熒光信號和 VSSC 對自然樣本中的不同病毒和細菌進行區分，并對各種類型的病毒和細菌進行自動計數，操作簡單，計數準確，減少了人力，降低了檢測成本。