活性成分總黃酮的提取方法

總黃酮的提取方法
1、 熔劑法
熱水提取法、堿性水或堿性稀醇提取法、有機溶劑提取法 2、
2、微波提取法
微波提取是利用不同結構的物質在微波場中吸收微波能力的差異，使基體物質中的某些區域或提取體系中的某些組分被選擇性加熱，從而使被提取物質從基體或體系中分離，進入介電常數較小，微波吸收能力相對差的提取劑[1]。這種方法的優點是對提取物具有較高的選擇性、提取率高、提取速度快、溶劑用量少、安全、節能、設備簡單[2]。 2.2 超聲波提取法
用超聲波提取法提取黃酮類物質，是目前比較新的方法。原理是利用超聲波在液體中的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外，還利用其次效應，如機械振動、擴散、擊碎等，使其加速被提取成分的擴散、釋放。超聲波提取法具有設備簡單，操作方便，提取時間短，產率高，無需加熱，同時有利于保護熱不穩定成分，省時，節能，提取率高的優點。
3、 超臨界流體萃取法
超臨界流體萃取技術是利用超臨界流體處于臨界溫度和臨界壓力以上，兼有氣體和液體的雙重特點，對物質具有良好的溶解能力，從而作溶劑進行萃取分離。可做超臨界流體的物質很多，一般為低分子量的化合物，如CO2、C2H6、NH3、N2O 等。目前多采用CO2 做萃取劑，因為它具有密度大、溶解能力強、臨界壓力適中、臨界溫度接近常溫、不影響萃取物的生理活性、無毒無味、化學性質穩定、生產過程中容易回收、無環境污染、價格便宜等一系列優點。但單一的CO2作萃取劑只對低極性、親脂性化合物有較強的溶解能力，對大多數極性較強的組分則不起作用，因此，在其中加入夾帶劑，通過影響溶劑的密度和溶質與夾帶劑分子間的作用力來影響溶質在二氧化碳流體中的溶解度和選擇性[15]。超臨界流體萃取技術有許多傳統分離技術不可比擬的優點：過程容易控制、達到平衡的時間短、萃取效率高、無有機溶劑殘留、對熱敏性物質不易破壞等[16]。但它所需要的設備規模較大，技術要求高，投資大，安全操作要求高，難以用于較大 規模的生產。
4、 酶法提取
酶解法適用于被細胞壁包圍的黃酮類物質，利用酶反應的高度專一性，破壞細胞壁，使其中的黃酮類化合物釋放出來。黃劍波等[22]采用纖維素酶輔助法從甜茶中提取黃酮類化合物，黃酮類物質的提取率為91%，提取純度為54%。王悅等[23]對桔皮細胞進行游離酶、固定化酶和常規法提取，黃酮得率分別是1.43%，0.94% 和0.79%，和傳統的方法相比，游離酶法的總黃酮得率提高了81%。
5、雙水相提取法
雙水相提取技術是瑞典Per Albersson首先發現并研究 的一種技術，雙水相萃取法屬于液- 液萃取，當物質進入雙 水相體系后，由于表面性質、電荷作用和各種力的作用，溶 液環境的影響，其在上、下相中的濃度不同，即各成分在兩 相間選擇性分配，從而達到萃取的目的。由于雙水相體系分 相快、使用溫度低、容易操作、無污染、提取率高，因此成 為黃酮化合物富集分離的一種有效方法。張春秀等[24]取一 定量的銀杏葉浸提液，加到PEG1500/ 磷酸鹽體系雙水相 系統中，則黃酮類化合物進入上相PEG，從而將黃酮類化合 物分離，提取率可達98.2%。
6、 半仿生提取法
半仿生提取法是將整體藥物研究法與分子藥物研究法相結合，模擬口服給藥后藥物經胃腸道轉運的環境，為經消化道給藥的中藥制劑設計的一種新的提取工藝。這種提取方法的特點是可以提取和保留更多的有效成分，能縮短生產周期、降低成本。
7、膜分離法
膜分離法主要有超濾、微濾、納濾和反滲透等，其中超濾法是膜分離的代表，它是唯一能用于分子分離的過濾方法，是以多孔性半透膜為分離介質，依靠薄膜兩側壓力差作為推動力來分離溶液中不同分子量的物質。由于大多數黃酮類化合物的分子量在1000 以下，而非有效成分如大多數的多糖、蛋白質等分子量多在50000 以上，因而使用超濾能有效去除蛋白質、多肽、大分子色素、淀粉等，達到除菌、除熱原、提高藥液澄明度以及提高有效成分含量等目的。這種方法操作簡便、不需要加熱、不損壞黃酮類化合物，提取效果好、超濾裝置可反復使用。于濤等[26]研究了銀杏葉中黃酮類化合物的提取過程及工藝，使用超濾技術對粗提的產品進行精制，對影響超濾的工藝條件進行了考察，超濾后產品中黃酮質量分數達到33.99%。
8、 熱壓流體萃取法
熱壓流體萃取法是一種快速、環保、便宜、有效地萃取生物活性物質的方法。Chaorui Chen等[27]采用熱壓流體萃取法從巴西蜂膠中提取了7種黃酮類化合物，結果表明，通過熱壓水萃取的樣品中當存在表面活性劑時萃取物的固體含量更高，當使用熱壓脂溶萃取時，7種黃酮類化合物的含量在脂溶萃取中超過了水溶萃取。KairHartonen等[28]用熱壓水萃取法從白楊中萃取了黃酮類化合物，考察了萃取時間、溫度和壓力等因素的影響，并與超聲波萃取、高速逆流色譜做了比較，結果表明用熱壓水萃取法在150℃萃取35min效 果最好。
2.9 高壓液相提取法
Ying Zhang等[29]通過高壓液相萃取法從魚腥草中萃取了黃酮類化合物，研究了乙醇濃度、流速、溫度和壓強等因素的影響，并與熱浸法和超聲波輔助萃取法進行對比，發現高壓液相萃取法提取效果較好，當使用50% 乙醇，溶劑流速為1.8mL/min，溫度為70℃，壓強為8MPa 時，黃酮類化合物的得率和濃度可以達到3.152% 和23.962%