氯化鋰沉淀法去除質粒制備物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于兩種核酸在氯化鋰溶液中的溶解度有所不同。氯化鋰是強脫水劑，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剝離染色質上的蛋白質（Kondo 1979)。因此，質粒粗提物中的高分子質量 RNA 和蛋白質可在高濃度氯化鋰溶液中形成沉淀，從而可通過低速離心加以分離（實例請見Kondo et al. 1991)。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。
| 實驗方法原理 | 氯化鋰沉淀法去除質粒制備物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于兩種核酸在氯化鋰溶液中的溶解度有所不同。氯化鋰是強脫水劑，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剝離染色質上的蛋白質（Kondo 1979)。因此，質粒粗提物中的高分子質量 RNA 和蛋白質可在高濃度氯化鋰溶液中形成沉淀，從而可通過低速離心加以分離（實例請見Kondo et al. 1991)。 |
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| 實驗材料 | DNA 樣品 |
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| 試劑、試劑盒 | 乙醇異丙醇LiCl乙酸鈉TE |
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| 儀器、耗材 | Sorvsll SS-34 轉子或性能相同的替代轉子 |
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| 實驗步驟 | 一、材料
1. 緩沖液和溶劑
乙醇，異丙醇，LiCl ( 4 mol/L)，乙酸鈉（3mol/L, pH 5.2)，TE ( pH 8.0)，含有濃度為 20 μg/ml RNase A 的 TE ( pH 8.0)。
2. 核酸和寡核苷酸
DNA 樣品，CsCl 密度梯度離心純化。
3. 離心機和轉子
Sorvsll SS-34 轉子或性能相同的替代轉子
二、方法
1. 測定質粒制備物體積，加入 0.1 體積的 3 mol/L 乙酸鈉（pH 5.2 ) 和 2 倍體積的乙醇，置混合物于 4℃ 30 min。
2. 于 4℃ 以大于 10000 g ( > 9000 r/min, 用 Sorvsll SS-34 轉子 ) 的轉速離心 15 min 回收核酸沉淀，盡可能多地傾去上清液。而后打開管蓋置于工作臺上數分鐘以蒸發乙醇。
3. 用含有 RNase A ( 濃度 ≥ 100 μg/ml ) 的 1 ml TE ( pH 8.0) 溶解濕的核酸沉淀。
4. 加入 3 ml 4 mol/L LiCl 溶液，置于冰上 30 min。
5. 于 4℃ 以 12000 g ( 10000 r/min，用 Sorvsll SS-34 轉子）離心 15 min, 從沉淀的核酸中分離 DNA 質粒。
6. 將上清液轉至一新的離心管，加入 6 ml 異丙醇，室溫放置 30 min 以沉淀質粒 DNA。
7. 于 4℃ 以 12000 g ( 10000 r/min, 用 Sorvsll SS-34 轉子）離心 15 min, 回收沉淀的質粒 DNA。
8. 小心傾去上清液，加入 5~10 ml 70% 乙醇，簡單振蕩離心管，而后于 4℃ 以 12000 g 離心 10 min。
9. 小心傾去上清液，打開管蓋置于工作臺上數分鐘直至乙醇蒸發殆盡。
10. 用 TE ( pH 8.0 ) 溶解濕的 DNA 沉淀。 |
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