植物組織中可溶性蛋白質含量的測定（福林－酚試劑法）

一、原理
福林（Folin）－酚試劑法結合了雙縮脲試劑和酚試劑與蛋白質的反應，其中包括兩步反應：第一步是在堿性條件下，與銅試劑作用生成蛋白質－銅絡合物；第二步是此絡合物將磷鉬酸、磷鎢酸試劑還原，生成磷鉬藍和磷鎢藍的深藍色混合物，顏色深淺與蛋白含量成正相關。在650nm比色測定的靈敏度比雙縮脲法高100倍。由于肽鍵顯色效果增強，從而減少了因蛋白質種類引起的偏差。該法適于微量蛋白的測定（范圍為5～100μg蛋白質）。

二、材料、儀器設備  及試劑
（一）材料：各種植物  材料
（二）儀器設備：1. 722分光光度計  ；2. 離心機；3. 恒溫水浴；4. 定量加樣器；5. 冷凝回流裝置一套；6. 研缽；7. 離心管；8. 刻度移液管；9. 微量滴定管；10. 試管等；
（三）試劑： 標準蛋白質溶液：稱取25mg牛血清蛋白，溶于100ml蒸餾水中，使終濃度為250μg／ml；試劑甲；試劑乙。

三、實驗步驟
（一）標準曲線的繪制
1. 取18×200mm試管7支，1～7編號，分別加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml標準蛋白質溶液，用蒸餾水補足1ml，使每管含蛋白量分別為0、25、50、100、150、200、250μg／ml。
2. 用定量加樣器給每支試管中加入5ml甲液，混勻，于30℃下放置10min。
3. 再向試管中噴射加入0.5ml乙液，立即振蕩混勻，在30℃下準確保溫30min。
4. 以不加標準蛋白的1號管為空白，在650nm下用1cm光徑的比色皿測定吸光度。以標準蛋白濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。
（二）樣品的測定
稱取鮮樣0.8g，用5ml蒸餾水或緩沖液研磨成勻漿后，定容25ml過濾，取濾液1.0ml于試管中，然后重復標準曲線繪制中的2～4步驟，以空白管調零，測定吸光度。根據吸光度查標準曲線，求出樣品中的蛋白質含量。

四、結果計算：
樣品中蛋白的含量（mg/g）＝C×VT/（Vs×FW×1000）
式中：C－查標準曲線值（μg）；VT－提取液總體積（ml）；FW－樣品鮮重（g）；Vs－測定時加樣量（ml）
粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×6.2