植物體內硝態氮含量的測定實驗

實驗方法原理：在強酸條件下NO₃^－與水楊酸反應，生成硝基水楊酸。生成的硝基水楊酸在堿性條件下（pH＞12）呈黃色，在一定范圍內，其顏色的深淺與含量成正比，可直接用分光光度計測定。

實驗步驟：一、材料儀器設備及試劑

1. 材料：小麥或水稻等植物的葉片；

2. 儀器設備：分光光度計；電子分析天平；10ml、20ml刻度試管；移液管；25ml容量瓶；小漏斗（ф5cm）；玻棒；洗耳球；電爐；鋁鍋；玻璃泡；13.7cm定量濾紙若干。

3. 試劑及配制

10μg·ml－1 NO3―-N標準母液配制：精確稱取烘至恒重的KNO30.1444g，溶于蒸餾水中，定容至200ml（即為100μg·ml－1 NO3―-N溶液）。然后再吸取該溶液10ml，加蒸餾水稀釋至100ml，即為10μg·ml－1 的NO3―-N標準液。

5％水楊酸-硫酸溶液配制：稱取5g水楊酸先加少量濃硫酸（密度為1.84）溶解后，再加濃硫酸定容至100ml，搖勻，貯于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。

8％氫氧化鈉溶液配制：稱取20g氫氧化鈉溶于250ml蒸餾水中。

二、實驗步驟

1.  NO3―-N標準曲線的制作

（1） 取6支10ml刻度試管，編號，按下表配制每管含量為0～10μg的NO3―-N標準液。加入表中試劑后，搖勻。在室溫下放置20min后，每管再加入8.6ml 8﹪NaOH溶液，搖勻，使使顯色液總體積為10ml。然后以0號管為空白對照，在410nm波長處測定吸光度（A）值。


（2） 標準曲線繪制

以1～5號管的NO3―-N含量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

2. 樣品中硝酸鹽的測定

（1）樣品液的制備

取一定量的植物葉片剪碎混勻，稱取2～3g（三份），分別放入三支20ml刻度試管中，加入10ml蒸餾水，用玻璃泡封口，置于沸水浴中提取30min。到時間后取出，用自來水冷卻，將提取液過濾到25ml容量瓶中，并用蒸餾水反復沖洗殘渣，最后定容至刻度。

（2）樣品液的測定

取三支10ml刻度試管，分別加入樣品液0.1ml，蒸餾水0.9ml, 5％水楊酸-硫酸溶液0.4ml，混勻后置室溫下20min，再慢慢加入8.6ml 8％NaOH溶液，搖勻，使顯色總體積為10ml，待冷卻至室溫后，以標準曲線0號管作空白對照 ，在410m波長處測定吸光度（A）值。

三、結果計算

根據樣品液所測得的吸光度（A）值，從標準曲線上查出NO3―-N的含量，按下式計算樣品中NO3―－N含量。