從臨床樣本出發進行芯片、測序等高通量生物學研究是最常用的思路,但樣本采集過程受制于病理特征、病例數量等因素,耗時費力。無數期盼等來了期待中的臨床樣本,做個RNA抽提還常常……

降解樣本的RNA完整度低,長鏈RNA變成了短鏈,在常規的擴增過程中會發生探針檢測的目的片段的丟失,導致芯片結果的不準確。
遇到RNA降解了怎么辦?
有條件的話,重新收樣一定是更佳選擇。樣本取材時注意操作迅速穩定,盡快液氮速凍。也可以選用RNAlater等RNA保存試劑,但也需要嚴格按照此類試劑的操作規范進行,否則也達不到對RNA的保護效果。比如浸泡RNAlater前,組織樣本盡量切割成任一方向小于0.5cm的小塊,以保證浸泡盡可能充分。
但是珍貴樣本怎么可能輕易重新取到呢?降解的珍貴樣本真的只能扔了么?No!
針對降解樣本Affymetrix官方推出了一款表現優秀的降解RNA擴增標記試劑盒:SensationPlus? FFPE Amplification and 3’ IVT Labeling Kit。該試劑盒使用隨機引物和OligodT引物混合使用的策略,可以有效擴增20-200ng的降解樣本RNA,甚至FFPE樣本的RNA,讓這些低量降解的樣本活過來,為研究者節約了大量樣本收集端的時間付出。
測試一下這個試劑盒。針對同一細胞進行不同基因操作處理,進行3vs3的芯片表達譜檢測。收樣后因某種處理,抽提產物2100質檢RIN值在2左右。經過SensationPlus試劑盒擴增標記后雜交芯片,得到的結果非常漂亮。

數據質量優秀,差異基因(2倍以上差異)上調的有600多,下調的500多。后續GO/Pathway富集分析結果也很贊。
附分析流程:

保存良好的FFPE樣本抽提產物RIN值通常在1.8-2.8,所以FFPE樣本用這個試劑盒也能滿血復活。不過FFPE樣本會受保存條件和時間的影響,造成一定的數據不穩定,因此推薦上芯片要對FFPE樣本做有針對性的篩選,優先選擇時間更近的樣本。當然最好是整理出批量樣本后試抽提幾個,看看RNA的降解情況。
還等什么,樣本庫里睡著的石蠟塊,來讓它們發揮更大的作用吧!
93年前,時任紅一方面軍第一軍團第三軍軍長的黃公略在江西省吉安市青原區東固畬族鄉六渡坳指揮部隊轉移時,遭敵機襲擊壯烈犧牲。近年,疑似黃公略烈士遺骸在江西省吉安市青原區東固畬族鄉出土。復旦大學科技考古研......
12月21日,廣西壯族自治區衛生健康委員會官網發布了《廣西壯族自治區醫療機構外送樣本檢測管理暫行規定》,《規定》自發布之日起施行,有效期2年。《規定》提出,醫療機構要定期對開展外送檢測工作的臨床科室的......
美國圣母大學發明的突破性設備采用了一種創新的方法來“監聽”細胞的對話。未來,這項技術將幫助改善癌癥和其他疾病的診斷。相關論文發表在新一期《納米》雜志上。科學家早就知道,RNA在細胞內扮演信使的角色,翻......
9月14日,《自然-通訊》(NatureCommunications)在線發表了中國科學院分子細胞科學卓越創新中心石建濤組完成的最新合作研究成果(DNAmethylationprofilingtode......
免疫細胞作為防止病毒細菌等病原體入侵人體的“衛士”,是免疫系統中不可或缺的組成部分。明確免疫細胞類型、分化及功能狀態,對理解免疫力和揭示免疫相關疾病的發生發展機制具有重大的科學和社會意義。9月12日,......
據日媒報道,日本文部科學省稱,科學家在小行星探測器“隼鳥2號”采集的樣本中檢測到20多種氨基酸。這是首個在地球外存在氨基酸的證據,對理解這些至關重要的有機分子如何到達地球具有重要意義。2020年12月......
迷霧重重的本輪猴痘病毒傳播路徑,終于開始現出了其中較為清晰的一支。歐洲權威醫學雜志《歐洲監測》(EuroSurveillance)的最新一期發表了關于猴痘的研究特輯。一共四篇文章分別報告了5月在意大利......
各有關單位和人員:中國合格評定國家認可委員會(CNAS)組織制定了CNAS-RL10:2020《生物樣本庫認可規則》。目前,已完成文件征求意見稿,現于網上公示征求意見。相關單位和人員如有任何修改建議或......
2020年9月24日0—24時,我市新增新型冠狀病毒肺炎無癥狀感染者2例,系我市在對青島港大港公司“應檢盡檢”人員進行定期例行檢測時發現,相關情況已于9月24日晚發布。到目前,已排查到密切接觸者147......
據外媒報道,1972年,美國阿波羅17號飛船登月時,帶回了部分土壤和巖石樣本供未來研究。近日,美國航空航天局(NASA)的科學家時隔40多年后,打開了其中一份,為未來的登月計劃進行測試。5日,位于休斯......