方案16.2Giemsa染色

D-PBSA D-PBSA:甲醇（1:1)

未稀釋的Giemsa染液 甲醇 去離子水

本程序假設用單層細胞進行染色，而固定的懸浮細胞也可以使用，但從第6 步開始。

1. 移除培養基。

2. 用 D-PBSA 沖洗單層細胞，去掉沖洗液。

3. 加 D-PBSA / 甲醇液 5 ml/25 cm²，靜置 2 min，然后去掉 D-PBSA / 甲醇。

4. 加新甲醇 5 ml，靜置 10 min。

5. 棄掉甲醇液，用無水甲醇，沖洗單層細胞，去掉甲醇。

6. 此時，培養瓶經干燥可貯存，也可直接進行染色。用新無水甲醇沖洗后直接染色是非常重要的，即使是干的培養瓶。如果甲醇倒出，培養瓶靜置了一段時間后，殘留的甲醇會吸收水分，從而妨礙下一步的染色，即使是干燥的單層細胞也可從空氣中吸收水分。

7. 加入純的 Giemsa 染液，2 ml/ 25 cm²，確保保持覆蓋整層細胞。

8. 2 min 后，用 8 ml 水稀釋染液，并輕輕晃動 2 min 。

9. 用水置換染液，使形成的浮渣流走，而不會留下來覆蓋在細胞上，用自來水沖洗細胞，直到去除片狀粉色本底（沉積），但不能漂掉細胞的染色（通常 10~20s）。

10. 將水倒出，用去離子水沖洗，在單層細胞仍處于濕潤狀態時，用顯微鏡觀察細胞，干燥保存細胞，再觀察時重新濕潤。

Giemsa 染色步驟簡單，可提供對比強烈的多色性的染色，但沉淀出的染料，使細胞看起來呈斑點狀。由于氧化原因，在染液表面形成沉淀， 當加入水時，在整個溶液中，特別是在載玻片的表面上形成浮渣，沖洗染液時通過向上提升液面，而不是倒出液體或取出栽載玻片，在最后步驟，為防止細胞和浮渣接觸，徹底沖洗以便去掉留在制備物中的浮渣。