新的色譜技術可以提高我們對逆轉錄病毒感染的理解

　　由于它們同時表達，包膜病毒樣顆粒(VLP)和細胞外囊泡(EV)難以區分和分離用于分析目的。除了它們的共表達，EV和VLP表現出形態學，生物物理學和分子相似性。

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　　為了解決這一分離挑戰，研究人員最近設計了一種兩步色譜法，可以分離VLPs和EV進行精確分析。

　　開發分離VLP和EV的方法的主要動機之一是進一步了解HIV等逆轉錄病毒感染。雖然確實存在病毒純化方法，例如密度梯度離心，超濾或尺寸排阻色譜，但這些方法在分離EV和VLP的能力方面證明是低效的。

　　該新技術基于先前使用肝素親和層析作為分離VLP和EV的替代方法的工作。通常，哺乳動物細胞培養上清液中高水平的肝素結合蛋白在該一步法中競爭結合位點。新的兩步法能夠在沒有任何競爭的情況下分離兩種顆粒。該研究可為大規模病毒學研究鋪平道路，研究EV和VLP的生物學作用。

　　方法

　　在Alois Jungbauer博士的帶領下，該研究的研究人員開發了一種兩步色譜純化技術，首先從HEK 293細胞中收集HIV-1 gag VLPs和EVs。然后處理細胞，收集上清液并裝入裝有核  -殼珠的柱子中。然后通過肝素親和層析在第二步中進一步純化從柱中收集的流體級分。然后在肝素親和過程后收集第二組流體級分并分析總蛋白和雙鏈DNA(dsDNA)含量。

　　用于分離，定量和分析蛋白質含量的分析技術包括Bradford測定，十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，Western印跡分析和酶聯免疫吸附測定(ELISA)。

　　通過使用納米顆粒跟蹤分析(NTA)和透射電子顯微鏡(TEM)成像進行進一步的顆粒表征和尺寸分布分析。

　　結果

　　在收集的液體部分中發現EV的濃度顯著更高，而在洗脫峰中發現了VLP。不僅新技術能夠準確地分離兩種分子，還觀察到VLP和EV在整個色譜過程中保持完整的球形。

　　展望

　　使用這種技術，研究人員能夠證明兩步法可以將VLP和EV分開，從而可以單獨研究它們。他們希望這種快速和可擴展的技術可以應用于未來大規模生產VLP和EV，以更深入地了解這些分子的生物學功能。

　　致謝

　　這項研究所做的工作得到了聯邦數字和經濟事務部，聯邦運輸，創新和技術部，施蒂里亞商業促進局SFG，Standortagentur Tirol，下奧地利州政府和ZIT-技術機構的支持。維也納市通過COMET資助計劃，由奧地利研究促進局FFG管理。