擬南芥的培養

實驗概要

本實驗方法就擬南芥的培養技術進行了簡單介紹。

主要試劑

1. PNS營養液:

每升含2.5m1 1M磷酸緩沖液(pH5.5)

5ml 1M KN0₃，

2m1 1M MgSO₄.7H20，

2m1 1M Ca(N0₃)a.4H₂0，

2.5m1 20mM  Fe.EDTA，

1 ml MS微量兀素。

2. 人工土:

3份蛭石，1份珍珠巖和1份黑土混合。

實驗步驟

1. 將擬南芥種子種于澆過飽和PNS營養液的人工土中，當年收獲的種子種植后4^oC春化72h，隔年種子種植后春化24h.然后轉入人工培養室中在相對濕度80%，恒溫20-24^oC，光照強度80-200umo1/M²/S，光照周期為8h黑暗、16h光照培養。

2. 擬南芥的垂直培養:

將擬南芥的種子首先用70%的乙醇處理2分鐘，再用稀釋10倍的次氯酸鈉溶液，加一滴吐溫40(每50毫升1滴)，處理15分鐘，其間不斷的懸浮種子以保證消毒徹底。然后用無菌水洗4-5次。將種子用火過菌的牙簽點在加有激素、糖類或空白的PNS固體培養基平板上。培養基不能太厚，否則影響光照和觀察。4^oC低溫處理1-3天，在培養室(24^oC)豎直平板，進行連續光照培養。