(一)目鏡測微計的校正
1.放置目鏡測微計
取出接目鏡,旋開接目透鏡,將接目測微計放在目鏡的隔板上(有刻度的一面向下),然后旋上接目鏡,最后將此接目鏡插入目鏡鏡筒內。
2.放置鏡臺測微計
把鏡臺測微計放在顯微鏡載物臺上(有刻度的一面向上)。
3.校正接目測微計
用低倍物鏡觀察,對準焦距,通過調焦能看清鏡臺測微計的刻度;移動鏡臺測微計和轉動接目測微計使兩者刻度平行;轉動推進器從而使兩測微計某段起、止線完全重合,數出兩條重合線之間的格數。
用同法分別校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。
4.計算接目測微計每格的相對長度
接目測微計每格的長度(mm)=
(二)測定啤酒酵母細胞的大小
取下鏡臺測微計,將用壓滴法制成的啤酒酵母水浸片放在顯微鏡載物臺上,用高倍鏡觀察,調至物象清晰后,轉動接目測微計,測量酵母菌細胞的長度和寬度分別占有幾個格數,再將測得的格數乘以接目測微計每格的相對長度即可求出酵母菌細胞的大小。
要求在同一張片上測定10~20個酵母細胞并求出平均值,這樣才能代表酵母細胞的平均大小。
最后取出目鏡測微計,將接目測微計和鏡臺測微計分別用擦鏡紙擦拭后放回干燥處保存。
2. 微生物顯微鏡直接計數法
(一)青霉菌孢子懸液的制備
1.取一支孢子成熟的青霉菌斜面培養物,用無菌移液管吸取5ml無菌水加入菌管中。
2.采用無菌操作技術,用接種環將菌管內斜面上的孢子輕輕刮下,注入到盛有玻璃珠的三角瓶中,同樣方法將另15ml無菌水分三次再加入菌管中,將剩余的孢子全部刮干凈,將孢子液全部合并于三角瓶中,水平旋轉振蕩30min,然后倒入含有脫脂棉的無菌漏斗中過濾,得單孢子懸浮液。
(二)顯微鏡下孢子濃度測定
1.稀釋
定量取出孢子懸液,加到無菌干燥的試管中,按照一定倍數將其稀釋,稀釋的程度一般以血球計數板每小格內含有5~10個菌或孢子最為合適。
2.加樣
取潔凈干燥的血球計數板蓋上蓋玻片,用無菌滴管從蓋玻片的邊緣滴一滴孢子稀釋液,則孢子稀釋液自行滲入,注意不要產生氣泡。
3.計數
靜止5min,使孢子沉降不再流動,然后即可在顯微鏡下觀察計數。先在低倍鏡下找到計數室的位置,然后換成高倍鏡計數。如發現孢子懸液太濃或太稀釋,應重新稀釋并計數。計數一個樣品要從兩個計數室中的計算結果取平均值,以減少實驗誤差。
4.清洗血球計數板
計數完畢,將血球計數板取下,在水龍頭上用水柱沖洗,切忌用硬物洗刷,然后自然吹干,鏡檢觀察是否有孢子或其他沉積物,直至洗刷干凈。