將所采集樣品加熱或冷卻至20±1℃，按照下表將水樣、接種液、營養緩沖液、硝化抑制劑（視情況）加入樣品瓶，再用蒸餾水補充至總容量的體積數。將氫氧化鉀加入密封杯中(密封杯壁上有四個小孔供二氧化碳與氫氧化鉀顆粒接觸)，將密封杯放入瓶口，使瓶口完全密封.然后將BOD測試瓶放人測定儀，擰緊瓶蓋，放人恒溫培養箱，打開電源開始測定，隨著時間變化，在顯示屏上將出現一條曲線，通過曲線可直接讀出不同時刻的BOD值.
說明：
1) 一般情況下建議接種液加入量為20 mL。必要時調整接種液加入量，以獲得最佳測試結果；
2）若待測水樣中本身已經含有充足的微生物，則可以不加入接種液，而直接取水樣的體積數為總容量的體積數。稀釋因子皆為1。
3) 若試樣中含有硝化細菌，有可能發生硝化反應，需加入一顆硝化抑制劑。
計算修正結果：BOD修正值= BOD儀器讀值 × 稀釋因子