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  • 發布時間:2019-10-10 15:50 原文鏈接: 實驗室微生物基礎操作知識小匯總(二)

      培養

     

      1、根據培養時是否需要氧氣,可分為好氧培養和厭氧培養兩大類。

     

      好氧培養:也稱“好氣培養”。就是說這種微生物在培養時,需要有氧氣加入,否則就不能生長良好。在實驗室中,斜面培養是通過棉花塞從外界獲得無菌的空氣。三角燒瓶液體培養多數是通過搖床振蕩,使外界的空氣源源不斷地進入瓶中。

     

      厭氧培養:也稱“厭氣培養”。這類微生物在培養時,不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養過程中,最重要的一點就是要除去培養基中的氧氣。

     

      2、根據培養基的物理狀態,可分為固體培養和液體培養兩大類。

     

      固質培養:是將菌種接至疏松而富有營養的固體培養基中,在合適的條件下進行微生物培養的方法。

     

      液體培養:在實驗中,通過液體培養可以使微生物迅速繁殖,獲得大量的培養物,在一定條件下,還是微生物選擇增菌的有效方法。

     

      常規鑒定技術

     

      1形態結構和培養特性觀察

     

      (1)微生物的形態結構觀察主要是通過染色,在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細胞結構(包括細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性進行觀察,直觀地了解細菌在形態結構上特性,根據不同微生物在形態結構上的不同達到區別、鑒定微生物的目的。

     

      (2)細菌細胞在固體培養基表面形成的細胞群體叫菌落(colony)。不同微生物在某種培養基中生長繁殖,所形成的菌落特征有很大差異,而同一種的細菌在一定條件下,培養特征卻有一定穩定性。以此可以對不同微生物加以區別鑒定。因此,微生物培養特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內容。

     

      2生理生化試驗

     

      微生物生化反應:指用化學反應來測定微生物的代謝產物,生化反應常用來鑒別一些在形態和其它方面不易區別的微生物。因此微生物生化反應是微生物分類鑒定中的重要依據之一。

     

      微生物檢驗中常用的生化反應有:

     

      (1)糖酵解試驗

     

      不同微生物分解利用糖類的能力有很大差異,或能利用或不能利用,能利用者,或產氣或不產氣。可用指示劑及發酵管檢驗。

     

      (2)淀粉水解試驗

     

      某些細菌可以產生分解淀粉的酶,把淀粉水解為麥芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再變藍色。

     

      (3)v-p試驗

     

      某些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養基中能分解葡萄糖產生丙酮酸,丙酮酸縮合,脫羧成乙酰甲基甲醇,后者在強堿環境下,被空氣中氧氧化為二乙酰,二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物,稱v-p(+)反應。

     

      (4)甲基紅(methyl red)試驗

     

      腸桿菌科各菌屬都能發酵葡萄糖,在分解葡萄糖過程中產生丙酮酸,進一步分解中,由于糖代謝的途徑不同,可產生乳酸,琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物,可使培養基pH值下降至pH4.5以下,使甲基紅指示劑變紅。

     

      (5)靛基質(imdole)試驗

     

      某些細菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應表現出來。吲哚與對二甲基氨基苯醛結合,形成玫瑰吲哚,為紅色化合物。

     

      (6)硝酸鹽(nitrate)還原試驗

     

      有些細菌具有還原硝酸鹽的能力,可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨或氮氣等。亞硝酸鹽的存在可用硝酸試劑檢驗。

     

      (7)明膠(gelatin)液化試驗

     

      有些細菌具有明膠酶(亦稱類蛋白水解酶),能將明膠先水解為多肽,又進一步水解為氨基酸,失去凝膠性質而液化。

     

      (8)尿素酶(urease)試驗

     

      有些細菌能產生尿素酶,將尿素分解、產生2個分子的氨,使培養基變為堿性,酚紅呈粉紅色。尿素酶不是誘導酶,因為不論底物尿素是否存在,細菌均能合成此酶。其活性最適pH為7.0。

     

      (9)氧化酶(oxidase)試驗

     

      氧化酶亦即細胞色素氧化酶,為細胞色素呼吸酶系統的終末呼吸酶,氧化酶先使細胞色素c氧化,然后此氧化型細胞色素c再使對苯二胺氧化,產生顏色反應。

     

      (10)硫化氫(H2S)試驗

     

      有些細菌可分解培養基中含硫氨基酸或含硫化合物,而產生硫化氫氣體,硫化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物。

     

      (11)三糖鐵(TSI)瓊脂試驗

     

      (12)硫化氫-靛基質-動力(sim)瓊脂試驗

     

      3化學成分分析

     

      微生物保存

     

      基本原理是在挑選優良純培養物并使其處于休眠狀態基礎上,人為地創造一個有利于休眠的環境,使其長期保存后仍能保持菌種原有的優良特性。基本措施是低溫、真空、干燥。

     

      保藏方法:

     

      1

      定期移植法

     

      亦稱傳代培養保藏法,指將菌種接種于適宜的斜面培養基上,最適條件下培養,完成培養于4~6℃進行保存并間隔一定時間(3-6個月)進行移植培養的一種短期菌種保藏方法。

     

      2

      液體石蠟法

     

      指將菌種接種在適宜的斜面培養基上,最適條件下培養好后注入滅菌的液體石蠟,使其覆蓋整個斜面,再直立放置于低溫(4~6℃)干燥處進行保存的一種菌種保藏方法。

     

      3

      真空冷凍干燥法

     

      指將保藏的菌種細胞或孢子懸浮于保護劑中,經預凍后在真空條件下使水分升華,再經真空封存后保存的一種長期菌種保存方法。

     

      4

      -80℃低溫凍結法

     

      將菌種懸浮于保護劑中,在-80℃冰箱中凍結保存的一種長期菌種保藏方法。

     

      5

      液氮超低溫凍結法

     

      指懸浮于保護劑中的菌種經程控降溫后,移置于-196℃的液氮或-150℃左右的液氮氣相中保存的一種長期菌種保藏方法。


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