(1)確定模板RNA完整性，無DNA污染。
(2)RNA模板中不應含有擴增反應的抑制劑。
(3)為了防止模板降解，在反應體系中加入RNase抑制劑RNasin。
(4)使用適量的模板RNA，模板量太多會降低特異性，太少會導致擴增不出條帶或條帶太弱。
(5)若模板中有二級結構，可通過提高逆轉錄反應溫度來提高擴增效果。
(6)設計引物時，避免在引物3’端含有互補序列，避免形成內部發卡結構。
