用于其它遺傳病的檢測
Pici等人對囊性纖維化( cystic fibrosis,CF)基因突變進行了篩選研究,用4對外顯子引物進行多重PCR擴增,然后用限制性內切酶消化PCR產物,再進行垂直聚丙烯酰胺凝膠電泳,檢查15例發現有3例發生了基因突變。Pior等設計了8對引物同時檢測DMD/BMD和CF,通過凝膠電泳篩選 DMD/ BMD缺失突變,并用等位基因特異的寡核苷酸雜交確定CF突變是否存在。實驗表明,可以通過多重PCR的方法從血斑中獲得足夠的DNA進行分子分析,可用于新生兒的篩選。 Pillers等人m用多重PCR和 Southern雜交方法研究了一位同時患AIED(Aland island eye disease)、甘油激酶缺乏(GKD)和DMD的病例,發現在DXS67(1 deoxy-D-xylulose5 -phosphate synthase67)和DMD基因之間出現基因缺失。另外,還有用多重PCR方法篩查類固醇硫酯酶( steroid sulfatase,,srs)缺乏癥和診斷β地中海貧血患者的報道。
脊髓性肌萎縮癥( spinal muscular atrophy,SMA)是一種常染色體隱性遺傳神經性肌肉疾病。SMA會造成位于腦底和脊髓的下級運動神經元分裂,從而使其無法發出肌肉進行正常活動所依賴的化學及電信號。SMA主要影響患者的近端肌,即最靠近人體軀干部的肌肉。控制胃、腸和膀胱等器官運動的非隨意肌不會受到影響。各型都會對控制隨意肌運動的叫作運動神經元的神經細胞產生影響。最近的基因研究發現,運動神經元的死亡也許是因為缺少一種或幾種蛋白,或者是它們不能完全發揮其功能而導致的。 Simard等應用多重實時反轉錄PCR方法(muli Xplex real-time reverse transcriptase -PCR)對存活運動神經元( survival motor neuron,SMN)的轉錄本進行定量,共檢測了42個潛伏期SMA病人的血標本,每個病人取三個時間點,發現SMN的表達在每個病人的不同時間點上的轉錄是穩定的, SMN mRNA表達的實時定量檢測可以作為SMA臨床試驗的生物標志以作為SMA臨床試驗的生物標志
甘露糖結合素( mannose-binding lectin,MBu)是一種血清蛋白,能夠觸發補體激活,因此在先天性免疫中發揮重要作用。低水平的MBL會損傷病原微生物的調理作用,進而導致兒童的反復感染、免疫受損病人的嚴重感染以及自身免疫疾病。MHBL的編碼基因位于人類10q11.2~q21染色體,包括四個外顯子,血清中MBL水平受其啟動子多態性和MB2基因第一個外顯子突變的影響。目前應用的MBL基因分型方法主要有以下幾種:PCR限制酶切分析、序列特異寡核苷酸探針雜交( sequence-specific oligonucleotide probes,SsOP)、放大受阻突變體系( amplification refractory mutation system,ARMs)、ARMS聯合SSOP、異源雙鏈分析( heteroduplex analysis)、實時PCR以及應用小溝結合DNA探針的5端核酸酶分析。 Helena0等建立了種快速、高效的多重PCR方法對MBL2基因進行分型,并且將捷克人作為斯拉夫人的代表樣本,應用此方法研究了MBI2的等位基因頻率。共分析了359個不相關捷克人的MBL2基因,最終得出LYD單元型在斯拉夫人的祖先中比其它高加索人更常見,同時也證明了多重PCR是一種比傳統PCR方法更快速、簡便、省時省力的MBI2分型方法。
根據當前不育領域的研究,大約10%~15%的夫婦存在不育的問題,而在所有的不育個體中,男性不育大約占50%,其中40%~50%存在精子缺陷,如少精癥和無精癥。人類Y染色體的長臂對于精子的產生是必需的。在三個不同區域的缺失會導致嚴重的精子缺陷,包括非閉塞的無精子癥和精子減少癥。這些區域被稱為無精子癥因子( azoospermia factor,AZF),三個分離的非重疊區被定義為AzFa、AZFb、AZFc,與產生人類損傷的精子有關。近來的研究證明Yq染色體的微缺失會遺傳給其兒子。Yeom等應用多重PCR擴增6個位點,包括Y染色體的性別決定區( sex-determining region on the Y chromosome,SRY)作為陽性對照,無精子癥因子區域的5個序列標簽位點( sequence-tagged site,Srs),其中模板是從不育男性血液中提取的基因組DNA。本研究中的引物為Cy3標記,PCR產物可以與固定的探針雜交,提供了一種敏感、高通量檢測Y染色體缺失的方法,也是一種男性不育篩選的新方法。