外周血單個核細胞的分離實驗

體外測定免疫細胞的數量和功能常需將某種免疫細胞首先分離出來。本實驗是采用密度梯度離心法分離單個核細胞（mononuclear cell）。單個核細胞包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。 血液中各種細胞的大小和比重不同，因此，可用不同比重（密度）的分離液使不同比重的細胞在離心沉降過程中按相應密度梯度分布，從而達到分離各種細胞的目的，入單個核細胞的比重為 1.075～1.090，而紅細胞、粒細胞等的比重在 1.092 左右，因此，將血液輕輕加在比重為 1.076～1.078 的分離液上，使成一界面，再經離心，即出現分層，最上面為血漿層，界面處有一白色云霧狀細胞層即為淋巴細胞和單核細胞，而紅細胞和粒細胞則沉于管底。分離液的比重受溫度變化的影響，實驗應在室溫（20 ℃）下進行，若實驗時，室內溫度低于 20 ℃ 則先將分離液在 37 ℃ 水浴中高于 20 ℃ 的夏季，得率可能偏低。

人靜脈血（每毫升血用 20 單位肝素抗凝）

聚蔗糖－泛影葡胺（Ficoll-lsopaque）淋巴細胞分離液（比重 1.077±0.001）Hanks 液95％ 甲醇水溶液Jenner（May-Grunwald）染液Giemsa 染液95％ 乙醇

圓底小試管1 ml 或 2 ml 吸管毛細吸管載玻片水平式離心機

1. 加淋巴細胞分離液 2 ml 于圓底試管中。

用吸管直接伸入試管底加入，以防分離液沾上試管壁。

2. 于另一試管中，加靜脈抗凝血（每毫升血加 20 單位肝素）2ml，再加等量 Hanks 液將血液稀釋。

3. 用毛細吸管將此抗凝稀釋的血液沿管壁徐徐加入分離液試管中，使與分離液形成一界面，兩者不能混合。

4. 離心

室溫（20 ℃）下于水平離心機中，2000 r／min 離心 20min。

5. 取出試管，此時可見試管內已分層，用一毛細吸管插入界面白色細胞層，吸出細胞，移入另一試管內。

6. 加入 1 ml Hanks 液，懸浮細胞。

7. 制片

7.1 取一滴細胞懸液于一干凈載玻片的一端，用另一邊緣光滑的玻片按「吞噬作用」實驗的方法推片。

7.2 干燥、固定 于空氣中自然干燥，然后用 95％ 甲酵固定 2 min。

7.3 染色將涂片浸于 0.25％ Jenner 染液中 5～10 min，再移到 1：20 Giemsa 染液中 20min，用水沖洗。

7.4 脫色 用 95％ 乙醇脫色 30 s，水沖洗。

8. 鏡檢

干燥后，在顯微鏡下觀察單個核細胞的形態。若觀察到細胞著色太藍，可再脫色 30 s。