1.將成年實驗兔放置于固定盒內。用浸取了溫水的紗布反復擦拭使其耳內血管膨脹。 也可使用 70% 的乙醇。注意其靜脈血管位于耳朵外緣，動脈游走于中心。 2.在 5 ml 注射器上裝上 21 G 蝶形針頭，然后吸入 3 ml 腺病毒懸液，排除注射器內的空氣。注射器內含有一定量的空氣可使所有的溶液被注射入內。 3.扎入蝶形針頭至兔耳靜脈，并沿血管行進足夠的深度以方便固定針頭。開始以 lml/min 的速率注射腺病毒。在蝶形針頭內留滯少量的溶液，注意一定不能注射人任何空氣。 4.移出針頭，然后迅速用紗布墊子壓住扎口止血。 5.用涼水輕柔的清洗兔耳。并在兔耳上涂抹少量凡士林。觀察兔子 10~15 min，如果兔看起來要昏睡，撫摸它保持其清醒。并立起或移動固定盒。 支持方案 收獲肝組織以分析轉基因表達如果轉基因編碼的蛋白分泌至循環系統，那么其表達可經抽取動物血液并通過對血漿中的蛋白進行免疫雜交（如 CPMB 單元 10.8) 或酶學試驗（如 CPMB 單元 11.2) 來驗證。對于胞內或膜蛋白，肝組織收獲后，轉基因表達常應用免疫組化或免疫熒光（如 CPMB 第 14 章)、酶學試驗（通常用冰凍切片或石蠟切片）、免疫雜交進行分析。可采用多重時間點來監控轉基因表達的水平和持續時間。 1.注射腺病毒后，改善環境以侍養實驗鼠或兔 3~5d。用繩帶將動物的腳固定至解剖器上，使其腹部朝上，并保持其四肢伸展。 2.用 70% 的乙醇潤濕動物腹部的毛發。用鑷子夾起其腹部的皮膚并沿中線切割，將其皮膚與腹壁分離。使用鑷子提起其腹壁，繼續沿中線切割，注意不要損傷其內臟。再在剖面的側位進行一些切割，然后將其皮膚和腹壁翻折過來。 3.小心的切除肝臟，避免用鑷子夾住肝臟組織。將其放置于滅菌的塑膠盤上。用兩片干凈的刀片將肝組織切碎。保持一把刀片與切割方向一致，然后拖動另一刀片來切割其鄰近組織。 4.將肝組織樣品按以下一種或多種方法進行保存。 a.石蠟切片。將切割的組織碎片（幾毫米）置入福爾馬林緩沖液中。包埋前固定過夜或更久。 b.新鮮冰凍切片。切碎的組織放人塑料模具中（對于小鼠肝臟，22 mmX22 mm 大小的模具即可容納一片大的或兩片小的肝組織），然后用 OCT 復合物進行覆蓋。在通風櫥中放置一個較淺的容器，裝入約 1in(約 2.5 cm) 的 2-甲基丁醇以及于冰球或磨碎干冰。當其冷卻后，將塑料模具放入容器中，使得 2-甲基丁醇的冷卻程度與 OCT 的相當。當完全冰凍后，將樣品保存于一 70°C。在低溫恒溫器中切割前先預冷至一 20°C。 c.RNA 純化（Northernblot) 或蛋白制樣（immunoblots)。應從一些不同的肝葉中切取組織，并放人標記好的凍存管內。投入液氮中，并保存至一 70°C。 展 | 