單細胞測序技術又稱“下一代“測序技術或深度測序技術,可以一次性對幾十萬至幾百萬條DNA分子進行序列測定,現已廣泛應用在基因組測序、基因表達分析、非編碼小分子RNA鑒定、轉錄因子靶基因篩選及DNA甲基化等相關的研究領域。
測序技術的突出優點是可以從細胞圖譜的角度,探測細胞特異性以及細胞間的差異,探索細胞間的協同運作方式,研究組織異質性問題,根據細胞層面的特征對疾病進行深度刻畫,能有效地解決組織樣本無法破解的細胞異質性難題,有助于發現新的細胞類型。
基于大量的單細胞基因表達數據,該平臺還可進行細胞表達特征聚類、亞群表達特征、標志物篩選等方面的分析,是一種高效的細胞基因表達水平的檢測技術,在發育與生殖、免疫、干細胞分化、腫瘤異質性、神經系統發育以及腦發育等研究領域中有著廣泛的應用。
單細胞測序能為單細胞中每個轉錄本標記特異性分子標簽,實現單細胞水平上基因表達譜的定量。同時,每個細胞也會被標記特異性細胞標簽,使得高通量平行建庫成為可能。結合單細胞分離技術,單次實驗可制備100-10000個單細胞文庫,用戶可根據需求定制引物,將檢測范圍集中在目標基因,大幅降低后續測序成本。
測序的工作流程包括4個關鍵步驟:1) 單細胞制備,2)單細胞分離和文庫制備,3)測序和初級分析,4)數據可視化與解讀。在整個工作流程中,有一些影響結果并決定研究能否成功的實驗注意事項和關鍵步驟。想要獲得準確的數據,得出有意義的結論,需要精心設計實驗,并按要求開展實驗。
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