體外培養的動物細胞可分為原代細胞與傳代細胞。原代細胞是指從機體取出后立即培養的細胞,進行傳代培養后的細胞即稱為傳代細胞。
?任何動物細胞的培養均需從原代細胞培養開始。動物很多組織的細胞,如幼年動物的腎、肺、卵巢、精巢、肌肉及腫瘤等組織的細胞較易培養,而神經細胞等則較難培養。
原代細胞培養步驟如下:首先取出健康動物的組織塊,剪碎,用濃度與活性適中的胰酶或膠原酶與EDTA(螯合劑)等將細胞連接處消化分散,給予良好的營養液與無菌的培養環境(接近體溫與體內pH),在培養中進行靜止或慢速轉動培養。但不論用何種培養液一般都要加一定量的小牛(或胎牛)血清,這樣細胞才能很好地貼壁生長與分裂。
動物細胞培養方法
1、貼壁培養
貼壁培養是指細胞貼附在某種基質上進行增殖的培養方法,適用于一切貼壁細胞。由于貼壁細胞具有貼壁要求,提高細胞密度就是使反應體系中比表面積最大化的有效方法。傳統的貼壁細胞培養方法包括轉瓶、多層平板培養和攪拌式微載體培養。轉瓶和多層平板培養由于不能有效監控細胞的生長, 操作比較繁瑣, 貼附面積具有限制性, 傳質和傳氧差, 在實際生產使用中受到極大的限制。目前, 貼壁細胞的微載體培養在細胞生產中得到廣泛的應用。
2、懸浮培養
懸浮培養是指細胞自由地懸浮于培養液內生長增殖的一種培養方法。懸浮生長的細胞其培養和傳代都十分簡便, 培養時只需將采集到的活體動物組織經分散、過濾、純化和漂洗后, 按一定密度接種于適宜培養液中, 置于特定的培養條件下即可良好的生長。傳代時也無需 再分散, 只需按比例稀釋后即可繼續培養。采用該方法培養的細胞增殖快、產量高, 且培養過程簡單, 是大規模培養動物細胞的理想模式之一。
3、大規模培養
動物細胞大規模培養技術是在貼壁培養和懸浮培養的基礎上, 融合了固定化細胞、流式細胞術、填充床、生物反應器技術以及人工灌流和溫和攪拌系統等技術而發展起來的, 目前已廣泛用于生產具有重要醫用價值的酶、生長因子、疫苗和單克隆抗體等, 已成為醫藥生物高技術產業的重要組成部分。目前比較成熟且有應用價值的大規模培養方法主要包括: 中空纖維法、微囊法和微載體法等。